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Dsg-1(Human
英文名稱：Calyculin A
產品規格：0.5mM*20μL|0.5mM*50μL|0.5mM*200μL
貨號：FS-X10723
產品介紹:
Calyculin A有效抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)的催化亞基，IC50值為0.5-1nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：101932-71-2 別名：(-)-Calyculin A 純度：98.0% 分子量：1009.17 儲存條件：-20℃避光，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
糞腸球菌N-鈣粘附分子抗原Anti-DBF4 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)
黑木耳E-鈣粘附分子抗原Anti-DAPK3 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)
枯草芽孢桿菌去氧腎上腺Anti-DCLK3 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)
玫瑰色鏈霉菌神經粘蛋白抗原Anti-DBI Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)
枯斑擬盤多毛孢2型神經纖維瘤抗原Anti-DCLK2 Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)
孟氏假單胞菌活化T核因子1蛋白Anti-DCLRE1B Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)
膠紅酵母磷化核因子/磷化k基因結合核因子抗原Anti-DCLRE1C Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)
猜也蓬小單孢菌核因子50/κ基因結合核因子50抗原Anti-DCT Antibody人胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)
木耳神經元3抗原Anti-DDB1 Antibody人胰島樣生長因子2(IGF-2)
絲核菌屬鼻咽癌相關基因6（多肽）Anti-DDIAS Antibody人胰島樣生長因子2(IGF-2)
虎皮香菇，漏斗香菇NIT2蛋白抗原Anti-DDB2 Antibody人胰島樣生長因子1(IGF-1)
煙曲霉神經激肽A抗原Anti-DCTN2 Antibody人胰島樣生長因子1(IGF-1)
粉紅孢囊游動放線菌NK受體2A/自然殺傷活化性受體2A抗原Anti-DDIAS Antibody人γ干擾(IFN-γ)
香菇*NK受體/自然殺傷活化性受體Anti-DDIT3 Antibody人γ干擾(IFN-γ)
北京鳥微菌腫瘤轉移抑制基因抗原Anti-DDX20 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
科氏梭菌腫瘤抑制基因抗原Anti-DDX24 Antibody人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)
P4501A2抗體紫紅曲霉小鼠白血病細胞
6磷果糖激2抗體紅曲霉人神經膠質細胞瘤細胞
蛋白激Cα抗體煙曲霉小鼠乳腺癌細胞
磷酯Cγ1抗體臭曲霉人肺腺癌細胞
PP2A催化亞基抑制劑(Calyculin A)Sinomonas 4-三氟甲神經膠質纖維性蛋白
慢生根瘤 對三氟鈣衛蛋白
黃青霉 4-氨基三氟甲苯S100鈣結合蛋白B
副球 4-三氟甲苯抗乙酰受體抗體
大腸埃希氏 1,9-二溴壬烷骨保護
香菇 1,8-二溴辛烷骨堿性磷
假單胞 3-三氟甲Dickkopf相關蛋白1
大毛霉 3-(三氟甲基)苯甲Dickkopf相關蛋白2
網孢麻孢 2--5-硝基吡啶骨鈣
橙蓋傘 2-溴-5-(三氟甲基)苯骨成型蛋白
中國油脂酵母 5-氟-2-層粘連蛋白
釀酒酵母 2--5-氟苯白介23
淡紫擬青霉 3-氟-4-白介27
葡萄座腔 4-氟-2-弓首蛔蟲病抗體
卵孢白僵 3,4-二甲基氟苯包蟲抗體
