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產品介紹:
PF-543Citrate是新穎的可滲透細胞的SPHK1抑制劑，Ki值為4.3nM。對SPHK1的選擇性是SPHK2的100倍以上。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：1415562-83-2 純度：98.22% 分子量：657.73 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱：PF-543 Citrate
產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號：FS-X11084
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
轉移生長因子β受體2抗體（TGF-βRⅡ，TGFβRⅡ） TGF beta Receptor II
轉移生長因子β3抗體（TGFβ3） TGF beta 3 propeptide
轉移生長因子β受體1抗體 TGF beta Receptor I
jia狀腺過氧化物mei抗體 Thyroid peroxidase
腫瘤壞死因子受體1相關死亡域蛋白抗體 TRADD
生精細胞凋亡相關基因3抗體 TSARG3
三碘jia狀腺suT3抗體 T3
按蚊硫酯包含蛋白-1抗體 Thioster-containing protein 1
生精細胞凋亡相關基因6抗體 TSARG6
酪氨suan激meiC抗體(神經生長因子受體的一種) Trk C
端粒mei結合蛋白P23抗體 Telomerase Binding Protein, P23
原肌球蛋白抗體 Trop-2
SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)*簡單類諾卡氏 (+)-Puerol B 2"-O-glucoside
大腸埃希 Clausine Z
土壤伊薩酵母 (E)-2-[3,4-雙(乙酰氧基)苯基]乙基 3-O-(2,3,4,6-四-O-乙?；?BETA-
盤長孢狀盤孢 Yuehgesin C
鐮刀 黃腐 D
燕麥嗜西瓜亞種* 中國臺灣三尖杉堿
總狀共頭霉（可訂購） Wilforol C
梅林青霉 葡萄 D
紫色紅曲 喜果
細孢毛霉 Uvedalin
葉生布勒擔子酵母 鉤藤甙元 C
金針菇雜19 Tupichilignan A
日本曲霉 雷藤二萜醌 B
無乳鏈球 Triptocallic acid D
Burkholderia stabilis Vandamme et al. Triptocallic acid A
