實(shí)驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
皺紋毛圓線蟲熒光定量PCR試劑盒探針法 | Trichostrongylus rugatus | 多種規(guī)格 | BJ-P10169 |
特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
BHK-21 [C-13] (倉鼠腎成纖維細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BIU-87 (膀胱癌細(xì)胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BRL 3A (大鼠肝細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BNL CL.2 (小鼠胚胎肝細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BRL (大鼠肝細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BS-C-1 (非洲綠猴腎細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BT-474 [BT474] (乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BT-549 (乳腺管癌細(xì)胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
BxPC-3 (原位胰腺腺癌細(xì)胞) 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
C127 [C-127] (小鼠乳腺腫瘤細(xì)胞)1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
皺紋毛圓線蟲熒光定量PCR試劑盒探針法丙酮醛(MGO)ELISA試劑盒 Methylglyoxal,MGO ELISA KIT
丙二醛(MDA)ELISA試劑盒 malondialchehyche，MDA ELISA Kit
表皮細(xì)胞生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒 EGF R ELISA Kit
表皮細(xì)胞活化肽因子(CAPF)ELISA試劑盒 Cuticular Active Peptide Factor,CAPF ELISA Kit
表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒 Epidermal growth factor，EGF ELISA Kit
表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒 epidermal keratin,EK ELISA Kit
表面膜免疫球蛋白M(mIgM)ELISA試劑盒 membrane IgM,mIgM ELISA Kit
表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA試劑盒 membrane IgD,mIgD ELISA Kit
表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA試劑盒 membrane IgA,mIgA ELISA Kit
表面活性蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒 Surfactant Protein D,SP-D ELISA Kit
