實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
豬霍亂病毒即PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒 | Hog Cholera Virus(CSFV)RTPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6857 |
特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件：-20℃以下，有效期12個(gè)月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 | 三、注意事項(xiàng) １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 ２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
2 ug pBAsi-mU6 pBAsi-mU6 低溫運(yùn)輸，-20℃保存BL瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)BL medium用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))250
2 ug pGL4.17[luc2/Neo] pGL4.17[luc2/Neo] 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人乳腺珠蛋白(Mammaglobin-A) ELISA試劑盒
凍干兔血漿 Freeze dried rabbit plasma 0.5ml*10BDS培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)BDS Medium用于培養(yǎng)擬桿菌250
100µL 小鼠抗VSV-G標(biāo)簽單抗 Anti VSV-G-Tag Mouse MAb -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)ELISA試劑盒
單增李斯特氏菌成套生化鑒定管 9種*2套/盒*5盒沙氏腦心浸液瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sabouraud BHI Agar250克真菌檢測(cè)
10g 硫酸葡聚糖 Dextran Sulfate 室溫保存特級(jí)胎牛血清進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Fetal bovine serum(Defined FBS) 100毫升BR
乳酸桿菌糖發(fā)酵培養(yǎng)基 Lactobacillus Carbohydrate Fermentation Medium 250g 0.625-40 ng/mL 人小眼相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)ELISA試劑盒
20次 Southern專(zhuān)用DNA Marker() 15.6-1000 pg/mL 人白介素33(IL-33)ELISA試劑盒
1瓶 MEL株 MEL 低溫運(yùn)輸和保存
腦心浸出液肉湯（BHI）GB標(biāo)準(zhǔn) Brain Heart Influsion Broth 250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Angiotensinogen
1g B12 Vitamin B12 4℃避光保存血清消化粉進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Serum powder250克BR
豬霍亂病毒即PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒Mallory PTAH染色液(自然氧化法) 100ml
Mallory磷鎢酸(PTAH自然氧化法) 3×100ml
Mallory PTAH染色液(化學(xué)氧化法) 100ml
Mallory磷鎢酸(PTAH化學(xué)氧化法) 3×100ml
Thomas磷鉬酸 2×100ml
Gomori銀氨溶液 100ml
網(wǎng)狀纖維染色液(改良Gomori銀氨法) 5×50ml
Gordon-Sweets銀氨溶液 100ml
網(wǎng)狀纖維染色液(改良Gordon-Sweets法) 6×50ml
麗春紅酸性品紅染色液 100ml
Masson三色染色液 7×50ml|7×100ml
