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elisa檢測試劑盒操作步驟和注意事項

來源:上海邦景實業有限公司   2020年08月03日 14:05  

elisa檢測試劑盒操作步驟:

實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul,余孔分別加標準品或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul(取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干。 

4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干。

6.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色(30分鐘以內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.  依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

 

elisa檢測試劑盒注意事項:

1.  洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

2.  一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

3.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。

4.  如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數。

5.在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。

6.底物請避光保存。

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