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食品中添加劑檢測(cè)前處理過(guò)程十分繁瑣，之前介紹過(guò)食品中維生素ADE的方法，通過(guò)雙三元液相全自動(dòng)在線二維分析技術(shù)，可以省去繁重的離線制備過(guò)程，分析效率得以飛速提升^[1]。此次賽默飛針對(duì)低含量VB12添加的飼料檢測(cè)，同樣輕松應(yīng)對(duì)難題，解放雙手，工作效率倍增。

飼料維生素檢測(cè)難點(diǎn)

現(xiàn)行有效的國(guó)標(biāo)方法主要有“添加離子對(duì)試劑的反相液相色譜分析方法”以及“使用氨基柱的色譜分析方法”^{[2] [3]},可前者見(jiàn)VB12的色譜保留存在難點(diǎn)，離子對(duì)色譜法平衡時(shí)間較長(zhǎng)；后者氨基柱法需特別注意柱子的使用范圍，對(duì)于習(xí)慣使用普通C18柱分析的用戶(hù)而言不太適應(yīng)。

國(guó)標(biāo)對(duì)于低添加VB12預(yù)混合飼料的指導(dǎo)（樣品溶液中維生素B??濃度小于2μg/ml），需要進(jìn)行離線的樣品富集、凈化步驟，常用手段包括固相萃取以及免疫親和法^[3][4]，首先需要進(jìn)行一次富集處理，多批次樣品送檢過(guò)程繁瑣且時(shí)間較長(zhǎng)。

對(duì)癥下藥——雙三元液相在線富集、除雜

使用賽默飛雙三元液相系統(tǒng)，樣品只需簡(jiǎn)單超聲過(guò)濾即可大體積直接上樣富集、除雜、分析，整個(gè)過(guò)程全部實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。下面是雙三元液相在線富集、除雜、分析的自動(dòng)化工作流程：

樣品凈化

轉(zhuǎn)移 / 分離

分離 / 再生

賽默飛雙三元特色方案介紹

賽默飛基于雙三元液相平臺(tái)開(kāi)發(fā)了維生素B??全自動(dòng)在線樣品富集測(cè)定方法，樣品超聲后過(guò)濾即可直接上樣測(cè)定。

相比采用離子對(duì)色譜冗長(zhǎng)的平衡時(shí)間，該法具有分析時(shí)間短，峰形良好的優(yōu)點(diǎn)。

Thermo Scientific™ UltiMate™ 3000

雙三元系統(tǒng)

雙三元系統(tǒng)測(cè)試結(jié)果^[5]：

VB12標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

VB12實(shí)際樣品溶液色譜圖

本方法重現(xiàn)性良好，連續(xù)6次進(jìn)樣重現(xiàn)性RSD=0.48%，且通過(guò)色譜柱優(yōu)化，相對(duì)于國(guó)標(biāo)方法而言，峰形更加良好（參見(jiàn)下圖國(guó)標(biāo)方法色譜圖），且自動(dòng)化程度高，大大提升了分析效率。

維生索B??標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（氨基柱)見(jiàn)圖A.1；維生素B??標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（C??柱）見(jiàn)圖A.2。

圖A.1 10μg/mL 維生索B??標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（氨基柱）

圖A.2 10μg/mL 維生索B??標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（C??柱）

參考文獻(xiàn)：

【1】在線二維液相色譜法同時(shí)測(cè)定嬰幼兒和成人配方營(yíng)養(yǎng)品中的維生素A、D3和E （張艷海，其布勒哈斯等， 色譜， Vol.33 No.3 291-297）

【2】GBT9841-2006: 飼料添加劑維生素B12粉劑

【3】GBT17819-2017:添加劑預(yù)混合飼料中維生素B12的測(cè)定液相色譜法

【4】GBT5009.217-2008:保健食品中維生素B12的測(cè)定

【5】AN_19026_HPLC_食品_Ultimate 3000 在線凈化富集法測(cè)定預(yù)混合飼料中Vitamin B12?

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