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轉氫酶2紫外分光光度法檢測試劑盒

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-27 09:36:56瀏覽次數:331次

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貨號 GOY-01S6568
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C 50-81-

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商品屬性:

產品名稱

轉氫酶2紫外分光光度法檢測試劑盒

規格

50管/48樣

檢測方法

紫外分光光度法

貨號

GOY-01S6568

商品介紹:

測定意義

TH位于線粒體的內膜上,又稱為線粒體復合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉化,調節線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應稱為TH-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

測定原理:

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉氫反應不能導致340nm吸光度發生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,測定375nm光吸收的增加速率,來計算TH-2活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔510分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

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轉氫酶2紫外分光光度法檢測試劑盒G鈉 1650 U/mg LRRC59蛋白抗體Dog IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗犬IgM抗體

D-青霉  99%LRRC41蛋白抗體Dog IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的兔抗犬IgM抗體

2-過氧化丁酮 >52%(GC)促黃體生成素受體抗體Dog IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗犬IgM抗體

2-過氧化丁酮 CP清蛋白α抗體Dog IgM  兔抗犬IgM抗體

鄰二二乙酯 AR,99.5%核纖層蛋白B2抗體DOCK1  質分裂付出蛋白1抗體

草酰二 98%層粘蛋白α5抗體DNPK1  DNA依賴蛋白激催化亞抗體

高嶺土 醫藥級L-瓜氨抗體Dnmt3a  DNA轉移-3α抗體

(R)-(-)-3--1,2- 97%泌升高蛋白1抗體Dnmt3 Beta  DNA轉移-3β抗體

(R)-(+)-縮水甘油 98%溶體相關膜蛋白4α抗體Dnmt1  DNA轉移1抗體

(R)-(+)-縮水甘油 98%分化相關因14抗體DNMBP  動力結合蛋白DNMBP抗體

(S)-縮水甘油 97%β內酰樣蛋白2抗體DNM1L  發動蛋白樣相關蛋白1抗體

硫安普霉素 分析標準品神經突觸粘附樣分子4抗體DNase II  脫氧核糖核2抗體

硫安普霉素 95%可溶性半糖凝集素3結合蛋白抗體DNase I  脫氧核糖核1抗體

伊維茵素 97%瘦素抗體DNase gamma  脫氧核糖核γ抗體

99%脂酯LPIN1抗體DNAPK/PRKDC  DNA依賴蛋白激催化亞抗體

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

 


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