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測定意義

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平。

測定原理：

MDA與硫代酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產物，在532nm有最大吸收峰，進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定600nm下的吸光度，利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

實驗方法學：

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

5-己炔-1- 96%對甲酸 CP,98%IL-2 (Interleukin-2)Human  IL-2抗原（人）

6-庚炔酸 97%對甲酸 AR,99%IL-23(Interleukin-23)  白介素-23抗原

4-羥酸 97%6-正基-2-硫代尿嘧 98%IL-4(Interleukin-4)  白介素4抗原

2-羥基-4-甲基吡 98%1,1-環已基二乙酸單酰 99%IL-4(Interleukin-4)human peptide  白介素4抗原

4-羥基-3-硝基吡 98%1,1-環己基二乙酸酐 98%IL-5 peptide  白介素5抗原

1-庚炔-3- 97%3,4-二甲氧基苯甲酸 99%IL-6 (Interleukin-6) Human  白介素6

3-吡 98%2,5-二甲氧基苯甲 98%IL-7(Interleukin-7)  白介素7抗原

1--2-硅基乙炔  97%2,5-二甲氧基-β-乙烯 98%IL-6R Alpha (IL6R-alpha)  白介素6受體α抗原

丙二醛（MDA）可見分光光度法檢測試劑盒2，6-二硝 98%IL-15 ELISA KIT  大鼠白介素15豚鼠脂蛋白關聯脂A2(LpPLA2)聯免疫吸附測定試劑盒

溴化鋅 99.999% metals basisIL-16 ELISA KIT  大鼠白介素16豚鼠胰蛋白原激活肽(TAP)聯免疫吸附測定試劑盒

化鋅IL-17 ELISA KIT  大鼠白介素17豚鼠酮脫氫E1(PDH E1)聯免疫吸附測定試劑盒

殺草強  分析標準品IL-1sR I ELISA Kit  大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ豚鼠神經調節蛋白1(NRG-1)聯免疫吸附測定試劑盒

3-氨-1，2，4-三唑 96%sE-selectin ELISA Kit  大鼠可溶性E選擇素豚鼠P62抗體(AP62A)聯免疫吸附測定試劑盒

4-氨-4H-1,2,4-三唑 98%IL-1sR II ELISA Kit  大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ豚鼠熱休克蛋白40(HSP-40)聯免疫吸附測定試劑盒

吩 98%17-OHCS ELISA Kit  大鼠17羥皮質類固豚鼠二氫硫辛脫氫(DLD)聯免疫吸附測定試劑盒

對羥 CPNAG ELISA Kit  大鼠N-乙酰-β-D-氨葡萄糖苷豚鼠C-反應蛋白(CRP)聯免疫吸附測定試劑盒

對羥 AR,99.0%17-KS ELISA Kit  大鼠17-酮類固豚鼠谷氨脫氫(GDH/GLDH)聯免疫吸附測定試劑盒  

吩噻 98%IL-2sR Alpha/CD25 ELISA Kit  大鼠白介素2可溶性受體α鏈豚鼠類粘蛋白2(ORM2)聯免疫吸附測定試劑盒

吩噻 分析標準品IL-2sR Beta ELISA Kit  大鼠白介素2可溶性受體β鏈豚鼠二氫嘧脫氫(DPYD)聯免疫吸附測定試劑盒

無水哌 99%IL-3 ELISA Kit  大鼠白介素3豚鼠載脂蛋白C4(ApoC4)聯免疫吸附測定試劑盒

哌 六水合物 98%IL-5 ELISA Kit  大鼠白介素5豚鼠尿苷二葡萄糖神經酰葡萄糖轉移(UGCG)聯免疫吸附測定試劑盒

哌,六水 分析標準品LR/Ob-R ELISA Kit  大鼠苗條素受體豚鼠視黃結合蛋白4(RBP4)聯免疫吸附測定試劑盒

碳化硅 99.9% metals basisLEP ELISA kit  大鼠瘦素豚鼠補體因子B(CFB)聯免疫吸附測定試劑盒

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。