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測定意義

生物體內巰基主要包括非蛋白質巰基和蛋白質巰基。巰基化合物在體內具有重要的解毒功能，對生物體的自我調節具有非常重要的生理意義。

測定原理：

巰基基團與5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。

自備實驗用品：

天平、研缽、可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿和蒸餾水，甲醇。

實驗方法學：

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

硝酸銅，三水  99.99% metals basis鄰苯二甲酸二正壬酯標準溶液 136.0μg/mL,溶劑:甲5-NT(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit  小鼠5核苷酸

硝酸銅，三水  ACS，98.0-102.0%p, p’-DDD標準溶液 49.9μg/mL,基體:甲苯和甲(體積比1:4)CD19(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD19分子

硝酸銅標準溶液 0.05000mol/L(0.05M)p, p’-DDE標準溶液 50.0μg/mL,基體:甲苯和甲(體積比1:4)CD3(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD3分子

碳酸鈣 AR,99%p, p’-DDT標準溶液 50.0μg/mL,基體:甲苯和甲(體積比1:4)CD4(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD4分子

碳酸鈣 99.99% metals basis敵草快標準物質 99.9%CD8(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD8分子

碳酸鈣 用于昆蟲培養，99%己標準物質 99.7％CD25(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD25分子

碳酸鈣 99.999% metals basis鮭魚精DNA成分標準物質 2.050mg/gCD20(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD20分子

四氯化碳 Standard for GC, ≥99.9% (GC) 鮭魚精DNA成分標準物質 2.050mg/gCD14(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD14分子

非蛋白質巰基微量法檢測試劑盒3,4-二氟 98%人抗底節(BG)自身抗體免疫試劑盒緊密連接蛋白19抗體phospho-KLF5(Ser311)  化腸道內富含的Kruppel樣因子5抗體

2,3-二氟 98%人抗肌內膜抗體(EMA)(IgA)免疫試劑盒緊密連接蛋白18抗體phospho-KLF5(Ser275)  化KLF5抗體

3,5-二氟 97%人抗肌內膜(EMA)抗體(IgG)免疫試劑盒緊密連接蛋白17抗體phospho-KLF5(Ser272)  化KLF5抗體

1,4-環己二酮單乙二縮酮 98%人抗肌集鈣蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒緊密連接蛋白16抗體phospho-Kidins220 (Ser918)  化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體

1,4-二 98%人抗肌動蛋白抗體(AAA)免疫試劑盒CELF3蛋白抗體phospho-KCND2/Kv4.2(Thr607)  化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體

2,3-二氟 97%人抗黃體生成素抗體(Anti LH Ab)免疫試劑盒鈣粘蛋白超家族CELSR1抗體phospho-KCND2/Kv4.2(Thr602)  化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體

3,4-二氟 97%人抗環胍氨肽(CCP)抗體免疫試劑盒牙骨質蛋白1抗體phospho-KCNC1(Ser503)  化離子通道蛋白Kv3.1抗體

對乙 97%人抗琥珀脫氫黃素亞單位抗體(IgG)免疫試劑盒CENPBD1蛋白抗體phospho-JUP(Tyr550)  化γ連環蛋白抗體

4-乙氧乙酮 98%人抗呼吸道合胞病抗體(RSV IgM)免疫試劑盒著絲粒蛋白I抗體phospho-JunD(Ser255)  化活化蛋白激D抗體

4-乙炔 98%人抗呼吸道合胞病(RSV)抗體免疫試劑盒著絲粒蛋白J抗體phospho-JunB(Ser79)  化活化蛋白激B抗體

3-乙炔 98%人抗呼吸道合胞病(RSV)抗體(IgG)免疫試劑盒著絲粒蛋白L抗體phospho-JunB(Ser259)  化活化蛋白激B抗體

4-乙聯 97%人抗紅抗體(RBC)免疫試劑盒著絲粒蛋白M抗體Phospho-JunB (Thr102/Thr104)  化活化蛋白激B抗體

4-乙環己酮 98%人抗核周因子(APF)抗體免疫試劑盒著絲粒蛋白N抗體phospho-JNK1/2/3(Thr183+Thr185)  化氨末端激1/2/3抗體

4-乙乙炔 98%人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)免疫試劑盒著絲粒蛋白Q抗體Phospho-Jak3 (Tyr980/981)  化蛋白酪氨激JAK-3抗體

4-戊乙炔 97%人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)免疫試劑盒CENTB2蛋白抗體Phospho-Jak3 (Tyr785)  化蛋白酪氨激JAK-3抗體

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。