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產(chǎn)品介紹：

T4 多聚核苷酸激酶（3'磷酸酶活性缺失）

描述：T4 多聚核苷酸激酶(T4 PNK)能夠催化 ATP 的 γ-位磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到寡核苷酸鏈（雙鏈或單鏈 DNA 或 RNA）的 5’-羥基末端以及 3’-單磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶還具有3’磷酸酶活性，將3’磷酸基團(tuán)從寡核苷酸的 3’磷酸末端、脫氧 3’-單磷酸核苷和脫氧 3’-二磷酸核苷上水解掉。該酶經(jīng)后，其 3’磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

儲(chǔ)存：-20℃ 可保存 2 年。
活性定義：
1Unit 指 37℃條件下，30 分鐘內(nèi)催化 1nmol 酸不溶性[32P] 摻入所需要的酶量。
注意：
（1）1×T4 PNK Buffer：70 mM Tris-HCl pH 7.6，10 mMMgCl2，5 mM DTT。
（2）熱失活：65°C 加熱 20 分鐘。
（3）一般來說，進(jìn)行激酶反應(yīng)之后是連接反應(yīng)。在這種情況下，T4 多聚核苷酸激酶反應(yīng)在連接酶反應(yīng)緩沖液中 37°C溫育 30 分鐘即可。反應(yīng)后的產(chǎn)物可直接進(jìn)行連接，無需改變緩沖液和進(jìn)行熱失活。如果連接時(shí)需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化狀態(tài)，則需要在連接反應(yīng)前熱失活 T4 多聚核苷酸激酶。

\注意：1 pmol 的 5’末端 DNA，相當(dāng)于 1 μg 的 PCR 產(chǎn)物(3kb 大小)。

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