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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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PCR反應(yīng)三步循環(huán)播放過程介紹

時(shí)間:2024/3/4閱讀:1221
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PCR過程分三步:變性--退火--延伸,PCR中會(huì)對這三步循環(huán)播放。

1. 變性

在開始準(zhǔn)備變性的過程中,要慢慢加熱混合物,加熱混合物時(shí),兩條鏈間氫鍵會(huì)融化,DNA兩股鏈會(huì)分開,就像上圖粉色的部分。如果混合物熱的情況下,引物不會(huì)和DNA黏在一起,兩條DNA鏈也不會(huì)黏在一起。

2. 退火

接下來混合物慢慢的冷卻,這時(shí)引物會(huì)黏在DNA上,因?yàn)橐镙^小,更容易漂浮起來,和DNA結(jié)合。溫度控制在54攝氏度左右可以保證引物序列和DNA互補(bǔ)配對,而DNA雙鏈不會(huì)黏在一起。

3. 延伸

這一步我們需要一個(gè)幫助DNA復(fù)制的工具,即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中的聚合酶(polymerase)。下圖中綠色的圖形就代表著DNA聚合酶,所到之處萬物生,這也是我們身體各個(gè)細(xì)胞中用來復(fù)制DNA的工具。聚合酶的作用方式也非常生猛,直接找到部分單鏈,部分雙鏈的地方,咬住那里的序列開始進(jìn)行復(fù)制。也就是說聚合酶會(huì)先找到引物,開始沿著引物進(jìn)行缺失的序列填充。如下圖中看到的,在一輪填充序列后,引物所在的鏈條(橙色鏈)會(huì)被補(bǔ)齊。這一步中會(huì)加入As, Cs, GsTs這些DNA原材料,這樣可以把他們整合到新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。這一步的溫度稍微高一些,大概是72攝氏度。最初我們加入的是雙鏈DNA,在一個(gè)周期后,我們會(huì)獲得四條鏈,兩個(gè)周期后獲得8條鏈,30個(gè)周期后,會(huì)獲得10億條DNA鏈。


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