【儀表網(wǎng) 行業(yè)標準】根據(jù)國家標準化管理委員會、民政部印發(fā)的《團體標準管理規(guī)定》及《中國計量測試學會團體標準管理辦法》有關規(guī)定，經(jīng)中國計量測試學會批準立項，由青島星賽生物科技有限公司等單位牽頭起草的《益生菌活菌計數(shù)及代謝活力檢測拉曼光譜法》團體標準現(xiàn)已完成征求意見稿的編制，為保證標準的科學性、嚴謹性和適用性，現(xiàn)面向社會廣泛公開征求意見。意見反饋郵箱：zhoupin@singlecellbiotech.com。
 

　　2001 年聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織和世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)提出，當攝入足夠數(shù)量時，對宿主產(chǎn)生健康益處的活性微生物稱之為益生菌。國際益生菌和益生元科學協(xié)會(ISAPP)2021 年對發(fā)酵食品定義為：通過所需的微生物生長和食品成分的酶轉化而制成的食品。其中特別指出，當發(fā)酵食品中含有確切的活益生菌時，才能標注“含有益生菌”，并認為改善食品營養(yǎng)、調(diào)節(jié)人體免疫和腸道菌群、含有影響腸道和機體功能的生物活性物質等，是其促進健康的潛在機制。近年來，隨著益生菌概念的流行，益生菌的產(chǎn)品線已經(jīng)從飲食補充劑擴展到臨床治療。對于益生菌，不同菌株的活細胞數(shù)是否符合標準是公眾主要關心的問題。但是，由于國內(nèi)益生菌行業(yè)長期缺乏產(chǎn)品標準規(guī)范，導致益生菌產(chǎn)品質量良莠不齊，許多商品的說明書上并未標注關于所含益生菌菌株的功效和產(chǎn)品中實際存在的活細胞數(shù)量(菌落形成單位[CFU/毫升])。因此，為規(guī)范愈發(fā)龐大的益生菌市場，避免益生菌產(chǎn)品市場規(guī)模不斷擴大而出現(xiàn)的虛假夸大宣傳等亂象，對商業(yè)益生菌產(chǎn)品進行包括快速活菌計數(shù)、原位活力測試在內(nèi)的定性和定量評價的檢測方法迫在眉睫。
 

　　然而，目前行業(yè)中廣泛應用的方法有很大的局限性。對于益生菌產(chǎn)品的活菌計數(shù)、活性檢測等質檢工作存在檢測周期長、成本昂貴、混合益生菌產(chǎn)品檢測效果差等問題。為提高益生菌產(chǎn)品的質量檢測能力，本標準提出了拉曼光譜檢測方法，對益生菌產(chǎn)品的活細胞數(shù)和原位活力進行測定。該方法能夠準確測定益生菌產(chǎn)品中的活菌數(shù)和活性指標。該方法的建立為今后豐富我國益生菌產(chǎn)品的質控工作打下了一個良好的基礎，并為制定中國自己的益生菌標簽法律法規(guī)以及檢測方法提供可靠的數(shù)據(jù)保障。
 

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本標準分為6個部分：范圍、規(guī)范性引用文件、術語和定義、試劑或材料、儀器設備、檢驗要求和方法。
 

　　本文件規(guī)定了益生菌產(chǎn)品活菌計數(shù)及代謝活力的術語和定義、描述了益生菌活菌計數(shù)方法和代謝活力的拉曼光譜檢測方法。
 

　　本文件適用于含益生菌產(chǎn)品的活菌計數(shù)及代謝活力檢測。包括添加的植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、副干酪乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、格氏乳桿菌、卷曲乳桿菌、乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌等一種或多種菌種。
 

　　檢測原理：
 

　　利用重水(D2O)同位素標記時，具有代謝活力的細胞會同化氘(D)并代替氫(H)進行合成代謝，使得細菌的脂類、蛋白質、DNA 等生物質被氘化，所產(chǎn)生新的 C-D 鍵可被拉曼光譜靈敏檢測到，并且碳-氘(C-D)峰強度可反映細胞的代謝活力。基于細胞的代謝活力來進行活菌計數(shù)，即具有代謝活力的細胞為活細胞。CDR 為 C-D 鍵的峰值光譜強度除以 C-D 鍵和 C-H 鍵的峰值光譜強度之和，以量化 C-H鍵中 D 的替代程度，即碳-氘峰值占比；所述 C-D 鍵的光譜強度是指在拉曼位移波數(shù)范圍(2040-2300)cm−1范圍內(nèi)的拉曼光譜強度；C-H 鍵的光譜強度是指在拉曼位移波數(shù)范圍(2800-3100)cm−1范圍內(nèi)的拉曼光譜強度。
 

　　儀器設備：
 

　　1.顯微拉曼光譜儀：光譜分辨率不低于5cm-1，拉曼位移波數(shù)范圍至少包含400cm-1-3200 cm-1。需配備50倍物鏡、100倍物鏡。
 

　　2.恒溫培養(yǎng)箱：溫控范圍包含36 ℃，波動<±1 ℃；
 

　　3.振蕩重懸器：轉速覆蓋1000-2800r/min；
 

　　4.分析天平：感量0.1mg和0.01g；
 

　　5.離心機：最大轉速不低于5000r/min，有2-8℃制冷功能；
 

　　6.顯微鏡：數(shù)值孔徑(50倍物鏡為0.5、100倍物鏡為0.9)，視場數(shù)26.5；
 

　　7.真空進樣裝置(適用于自動化檢測法)：真空度50mbar；
 

　　8.注射泵(適用于自動化檢測法)：流速范圍包含2μL/min；
 

　　本標準的建立不僅彌補了我國益生菌行業(yè)質控方法的空白，同時對益生菌活菌計數(shù)及活性檢測的標準檢測方法進行了補充，很好的解決了益生菌行業(yè)長期缺乏產(chǎn)品標準規(guī)范，導致益生菌產(chǎn)品質量良莠不齊的問題。