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  • 膠體金試紙條型DNA恒溫快速擴增試劑盒

膠體金試紙條型DNA恒溫快速擴增試劑盒

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具體成交價以合同協議為準
  • 型號
  • 品牌
  • 所在地北京市
  • 更新時間2023-08-13
  • 廠商性質其他
  • 所在地區北京市
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  • 產品數量92
  • 人氣值440
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(貨號:WLN8203KIT)產品名稱DNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)、膠體金試紙條型DNA恒溫快速擴增試劑盒原理概述:本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術:在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板
膠體金試紙條型DNA恒溫快速擴增試劑盒 產品詳情

(貨號:WLN8203KIT

產品名稱

DNA恒溫快速擴增試劑盒(膠體金試紙條型)、膠體金試紙條型DNA恒溫快速擴增試劑盒

 

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術:在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板;在侵入位點形成D-loop區域,并開始對DNA雙鏈進行掃描;待找到與引物互補的目的區域后,復合體Rec/ssDNA解體的同時,聚合酶也結合到引物的3’末端,開始鏈的延伸。依賴nfo酶的作用,加入根據模版設計的特異的分子探針,使用膠體金技術(三明治夾心法)可以對最終結果進行檢測。

產品特點:

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應時間短(僅需12 mins)等優點,反應組分為干粉狀態,操作簡便,易于保存。

本試劑對設備要求低,金屬浴、水浴鍋等即可進行反應操作,無需購買PCR擴增儀等價格高昂的專屬設備。

引物設計:

建議使用長度在 30-35 bp的引物,引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度;下游引物的5’端標記一個修飾基團(常用)。引物設計避免形成二級結構而影響擴增;擴增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

熒光探針設計:

在上下游引物中間,設計一段長度為46-52nt與目的片段互補的序列;5’端修飾一個抗原標記(典型FAM); 在5’端和3’末端的中部位置標記一個dSpacer(四氫呋喃,THF),作為nfo的識別位點;3’末端標記一個修飾基團,例如胺基、磷酸基團或C3-Spacer等。

試劑盒組成:

組成 含量
A buffer 1.6 mL×1管
B buffer 150 μL×1管
試劑 48份
使用說明書 1份

試劑盒儲存:

運輸條件:低溫運輸;

儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓和反復凍融;

產品有效期:12個月。

 

操作步驟:提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻

1) 每個干粉反應管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需融化混勻,否則會對實驗效果產生影響);

2) 每個反應管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針(引物和探針濃度為10 μM,對于多個反應、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應管中);

3) 向反應管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根據核酸濃度調整加入的核酸模板體積,并相應調整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為13.5 μL);

4) 最后向反應管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(請務必上下顛倒甩動反應管8-10次進行混勻;對于多個反應,建議將B buffer加至反應管的蓋子內側上下顛倒后混勻);

5) 混勻后,將反應液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應管放入恒溫設備中37-39 oC孵育8-12 mins;

6) 反應結束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的離心管中,混合均勻后,將膠體金試紙條的樣品端插入離心管中平衡,5 mins內觀察質控線與檢測線判讀結果。

體系配制

組分 體積(μL)
A buffer 29.4
上游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
探針(10 μM) 0.6
ddH2O和核酸模板 13.5
B buffer 2.5
總體積 50

注意事項:

1. 由于試劑盒靈敏度非常高,在進行反應時請注意避免核酸污染,并設置空白對照;

2. 使用時,請取出實驗所需的MIRA反應單元的數量,剩余部分請置于存儲條件下。

 

關鍵詞:水浴鍋
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