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產(chǎn)品名稱 | 包裝 | 分類 |
Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50圖片 | 100ul*50 | 表達感受態(tài)細(xì)胞 |
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細(xì)胞的種類：
*種：
Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50圖片是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。的凍存是細(xì)胞培養(yǎng)的基本操作，不同的實驗室采用的方法略有差異，但是都會遵循慢凍速溶的宗旨。
實驗報告：
一、Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50圖片分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡(Leica公司)下觀察圖像并拍照。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50圖片培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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BEL-7402(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R123大鼠角膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 人細(xì)胞;Hela
CM-H017人上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
ICOS Others Rat 大鼠 ICOS / AILIM / CD278 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
NB4細(xì)胞，人急性早幼粒白血病細(xì)胞 綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞,MFC-GFP細(xì)胞 成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-sf-prf
MS751(人子宮頸表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
主動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)
EDG6/SLP4 內(nèi)皮細(xì)胞的分化蛋白6抗體規(guī)格： 0.2ml
Lpin1 protein Lpin1 抗體規(guī)格： 0.2ml
Lpin1 protein Lpin1 抗體規(guī)格： 0.2ml
LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶抗體規(guī)格： 0.2ml
LPLUNC1 鼻咽癌癌基因抗體規(guī)格： 0.1ml
Y190 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50圖片白介素17F檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素17F檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素17受體A檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
白介素18檢測試劑盒 規(guī)格： 48T/96T
