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大鼠游離甲狀腺素(fT4)elisa定量檢測試劑操作流程

來源:上海撫生實業有限公司   2020年07月27日 16:17  

大鼠游離甲狀腺素(fT4)elisa定量檢測試劑盒操作流程如下:

1.待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理

2.酶標板置4℃,包被過夜。

3.洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

4.陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 

5.酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。 

6.洗板,同(4)。 

7.每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

8.酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。 

9.板,同(4)。 大鼠游離甲狀腺素(fT4)elisa定量檢測試劑盒

10.每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。 

11.每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 

12.分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13.數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

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