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名稱 | A431(A-431)人表皮癌細胞 (STR鑒定正確) |
別稱 | A431; A431/P |
種屬 | 人 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃ |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
注意事項 | 1、細胞成片生長，生長速度緩慢； 2、細胞貼壁很牢、較難消化；如有必要，可分次消化。 |
細胞傳代：
1. 試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活蛋白SNF5封閉多肽 | 北沙參染料法PCR鑒定試劑盒 |
豬輪狀病毒通用RT-PCR試劑盒 | 單酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移mei1ELISA試劑盒 |
人Salusin-α 試劑盒 ELISA | 沉默調(diào)節(jié)蛋白4ELISA試劑盒 |
人丁型肝炎IgM(HDV IgM)檢測試劑盒elisa | Q熱科克斯體1ELISA試劑盒 |
人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)ELISA試劑盒 | 層粘連蛋白β4ELISA試劑盒 |
人-半連接mei調(diào)節(jié)亞基(GCLM)試劑盒ELISA | 單純皰疹病毒抗原-1ELISA試劑盒 |
黑色su瘤抑制活性蛋白3封閉多肽 | 豬流感病毒PCR檢測試劑盒 |
載脂蛋白L1封閉多肽 | 病毒通用型(AIV-U)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
CD33封閉多肽 | 魚特定基因序列PCR檢測試劑盒 |
重組H5N6-HA1蛋白 | 產(chǎn)氣莢膜梭菌PCR檢測試劑盒 |
CD44封閉多肽 | 羅西奧病毒PCR檢測試劑盒 |
MKX蛋白封閉多肽 | A431(A-431)人表皮癌細胞輕型鏈球菌PCR檢測試劑盒 |
GPN3蛋白封閉多肽 | 禽腺病毒（IV型）PCR試劑盒 |
囊包蛋白/內(nèi)披蛋白封閉多肽 | 螺旋體通用PCR試劑盒 |
磷suan化Ephrin B封閉多肽 | 輪狀病毒PCR檢測試劑盒 |
細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。
