實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
牛皮蠅蛆PCR熒光定量檢測試劑盒 | Hypoderma bovisPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6881 |
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
96支 10 μL RNase-free 白吸頭（盒裝已滅菌） 常溫 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 8, mitochondrial
50mL Western印跡膜抗體清除劑 Western Blot Antibody Erasol 室溫保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Frizzled-1
5g 雙 (2- ) 亞氨基三 ( 羥甲基 ) 甲烷 Bis-Tris 室溫干燥保存 78-5000 pg/mL 人DNA末端核苷酸轉(zhuǎn)移（DNA nucleotidylexotransferase）ELISA試劑盒
100mL YPDG液體培養(yǎng)基 YPG Liquid Medium 常溫精肉湯進(jìn)口、國產(chǎn)Arginine Broth acc. To Schubert用于游泳池中假單胞菌檢測(Merck方法)250
2 ug pHR pHR 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人絲甘蛋白聚糖(Serglycin)ELISA試劑盒
5mL 成骨生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 78-5000 pg/mL 人腦啡肽原B(Proenkephalin-B)ELISA試劑盒
250mL HEPES Lysis Buffer with Triton HEPES Lysis Buffer with Triton 常溫保存 78-5000 pg/mL 人豐富酸性蛋白1（PRAP1）ELISA試劑盒
50次 M膜結(jié)合DNA清除試劑盒 Membrane-Bound DNA Erasol -20℃保存，通用洗柱液和RNA洗脫液可以室溫保存胰胨大豆瓊脂斜面進(jìn)口、國產(chǎn)Tryptic Soy Agar250克培養(yǎng)副溶血性弧菌，做 色素氧化實驗
2 ug pLVX-mCherry-C1 pLVX-mCherry-C1 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人αN已酰氨基葡糖苷(αNAG)ELISA試劑盒
10g 酸洗玻璃珠 Acid-Washed Glassbeads 常溫
250mL Galactose Solution（半乳糖溶液）,20%（W/V） Galactose Solution,20%（W/V） 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Macrophage mannose receptor 1
牛皮蠅蛆PCR熒光定量檢測試劑盒黑色標(biāo)本保色液 2×250ml
紫色標(biāo)本保色液 2×250ml
藍(lán)色標(biāo)本保色液 2×250ml
鈣鹽染色液(茜素紅S法) 2×50ml
鈣鹽染色液(改良茜素紅S法) 3×50ml
抑制劑激活劑
Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑) 20μl
Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制劑 ) 20μl
Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制劑) 20μl
Caspase 9 Inhibitors Ac-LEHD-FMK Z-LE(OMe)HD(OMe)-FMK(Caspase 9 抑制劑) 20μl
Caspase 10 Inhibitors Z-AEVD-FMK Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制劑) 20μl
