操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X97436 |
商品屬性：
名稱 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 2.組織來(lái)源：腦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新，并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細(xì)胞，它可以通過(guò)不對(duì)等的分裂方式產(chǎn)生神經(jīng)組織的各類細(xì)胞。需要強(qiáng)調(diào)的是，在腦脊髓等所有神經(jīng)組織中，不同的神經(jīng)干細(xì)胞類型產(chǎn)生的子代細(xì)胞種類不同，分布也不同。神經(jīng)干細(xì)胞作為干細(xì)胞的一種，它具有其它所有干細(xì)胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統(tǒng)大部分類型細(xì)胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間甚至終生，對(duì)損傷和疾病具有反應(yīng)能力。神經(jīng)干細(xì)胞在疾病、損傷狀態(tài)下具有增殖、遷移，并向神經(jīng)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力，已成為神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復(fù)和再生研究的熱點(diǎn)，體外建立穩(wěn)定的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)模型是其基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用的前提。神經(jīng)干細(xì)胞在培養(yǎng)3-4d后，可形成神經(jīng)球，神經(jīng)球在培養(yǎng)基中呈懸浮生長(zhǎng)，予以更換半量培基，1周后用吸管輕柔吹打球形克隆成為小的神經(jīng)球和單細(xì)胞懸液，將部分細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，2×105個(gè)細(xì)胞/瓶，每7-10d傳代1次，每隔3d離心更換半量培養(yǎng)基1次，培養(yǎng)條件不變。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞采用消化后差速貼壁，結(jié)合神經(jīng)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M139 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性懸浮 細(xì)胞形態(tài)球形 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%，Accutase 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人超化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
雞抗人IgG antibody 免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠纖溶原(Plg)免疫試劑盒*直銷
大鼠花生四烯酸5脂氧合(Alox5)免疫試劑盒*直銷
MMO-MUG培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
嗜鹽菌選擇性瓊脂 英文名稱：Halophilic Bacteria Selective Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
培養(yǎng)基C(EP標(biāo)準(zhǔn)) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.4mg無(wú)菌硫代水溶液 英文
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞Ehrlichiae spp.艾利希體屬（埃立克體屬）通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周Cyclin E 周期素E抗體 規(guī)格: 0.1mlMouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
Fructus schisandrae chinensis五味子探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周PEPT2/SLC15A2 腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlTSEN2 tRNA剪接內(nèi)切2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Hepatopancreatic Parvovirus(HPV)肝胰腺細(xì)小病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周DHRS2 脫/還原家族成員2抗體 規(guī)格: 0.2mlTMEM173 跨膜蛋白173抗體 規(guī)格: 0.2ml
HIV-2 Provirus HIV-2前病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-PIK3C3(Ser676) 磷酸化磷脂酰肌醇激3催化亞單位3抗體 規(guī)格: 0.1mlUPP1/Uridine Phosphorylase 1 核苷磷酸化1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Nairobi Sheep Disease Virus(NSDV)內(nèi)羅畢羊病病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周RanBP7/Importin 7 RAN結(jié)合蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2mlCREB-1 環(huán)苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
胡蘿卜源性成分PCR試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Tal1 T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白1蛋白/蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2mlGANAB/alpha Glucosidase II α葡萄糖苷2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Theileria equi馬泰勒梨形蟲(chóng)(原Babesia equi)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PCNA 增細(xì)胞核抗原抗體 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-Goat IgG/PE PE標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Pseudomonas syringae pv. tabaci丁香假單胞桿煙草致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BKCa channels/KCNMA 鈣激活鉀通道蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlIQCF1 IQCF1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Cortex mori桑白皮PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Biotin/APC APC標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml
Yersinia pestis鼠疫耶爾森(鼠疫桿)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周SPHK2 鞘氨醇激2抗體 規(guī)格: 0.2ml
