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在實際操作中,凍存原代細胞要進行復蘇,再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內,再次形成胞內結晶損傷細胞。
凍存細胞復蘇的注意事項
(1)從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養細胞都可以用于凍存,但為對數生長期細胞。在凍存前一天換一次培養液;
(2)將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷;
(3)凍存和復蘇用新配制的培養液。
凍存細胞復蘇的操作步驟
(1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
(2)迅速放入 38℃水浴中,并不時搖動,在 1 分鐘內使其*融化,然后在無菌下取出細胞。
(3)在 1000r/min速度下離心 5~10 分鐘,棄去上層液,加入適量培養液后接種于培養瓶中,接種濃度 1×109/L,置 37℃溫箱靜置培養,次日 更換一次培養液,繼續培養,觀察生長情況。若原代細胞密度較高,及時傳代?;驘o需離心直接將細胞加入瓶中,并加入培養基貼壁培養 12~24 小時 后,充去上清,換入新鮮培養基繼續培養。
100327-200201 檢查用 50mg 聯苯芐醇
100330-200101 含量測定 50mg 萘普生鈉
100331-201002 檢查用 50mg 撲米酮
100332-200001 檢查用 50mg 葡萄糖酸鋅
100333-200201 含量測定 50mg 曲安西龍
100334-200302 HPLC法含量測定 100mg 雙氯芬酸鈉
100335-200001 檢查 50mg 舒林酸
100336-200703 含量測定 100mg 替硝唑
100337-201003 含量測定 100mg 酮洛芬
100338-200502 含量測定 100mg 硝苯地平
原代細胞
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