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上海莼試生物技術有限公司
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原代細胞凍存

時間:2018-4-11閱讀:87
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原代細胞凍存是細胞培養、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是*的實驗操作。因為在沒有建立一個穩定的細胞系或穩定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。
培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態變差,
用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。
其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。
預防霉菌污染,可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線菌素D或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,制霉菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,將環境*消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統污染,檢查一下培養基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。
原代細胞注意事項     
  1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。
  2.DMSO要用新的,而且要避光保存。
  3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
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原代細胞

 

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