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(1)原代細胞機械法
1)用剪刀剪碎或者用鋒利的解剖刀剁碎組織;
2)將剪碎的組織加入勻漿器中勻漿;
3)用吸管或注射器抽吸細胞懸液,以分散細胞;
將細胞懸液在尼龍網或不銹鋼網上過濾,濾出的細胞懸液細胞計數后即可使用。
(2)酶處理法 此法是實體組織分散為單個細胞的主要方法。由于不同酶對細胞內和細胞間不同組分有特異消化作用,所以應根據所用組織類型確定使用酶的種類。此外,乙二胺四乙酸(EDTA)能結合組織中的二價鈣離子和鎂離子,而二價鈣離子和鎂離子有維持細胞表面完整性和維持細胞間質結構的作用,因此,幾種酶和EDTA聯合使用有助于充分消化實體組織,提高細胞產出效率。下面僅介紹組織消化的一般過程,對于每種組織消化時所用的具體步驟需參考該組織細胞培養時的消化方法。
1)將組織剪成l~2mm3左右的小塊。
2)用胰蛋白酶或膠原酶消化組織塊,胰蛋白酶適用于消化細胞間質較少的軟組織,如胚胎、上皮、肝、腎等組織。胰蛋白酶工作濃度一般為0.1%~0.5%。對于纖維較多的組織或較硬的癌組織常用0.25%膠原酶,膠原酶對組織中膠原蛋白類結構消化作用強,它僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。膠原酶常用劑量為0.1~0.3ug/m1。用大于組織量30~50倍的胰蛋白酶液或膠原酶液在37℃條件下消化組織,需每隔一定時間搖動一次。消化時間的長短依組織類型而定,一般來說,胰蛋白酶需作用20~60分鐘,膠原酶需4~48小時。在消化過程中,如發現組織塊已分散而失去塊的形狀,經搖動即可成為絮狀懸液,則可取出少量液體在顯微鏡下觀察,可見分散的單個細胞和少量的細胞團,可認為組織已消化充分。
3)消化完畢后,將細胞懸液通過100目孔徑尼龍網或不銹鋼網濾過,以除掉未充分消化的組織。
4)已過濾的原代細胞懸液經800~1000rpm低速離心5~10分鐘后,棄上清液,加PBS液,輕輕吹打形成細胞懸液,細胞計數后即可使用。
500mg Sodium Nitroprusside 13755-38-9 硝普鈉標準品
500mg Sennosides 517-43-1 番瀉苷標準品
500mg Riboflavin (Vitamin B2) 83-88-5 維生素B2標準品
500mg Quercetin 6151-25-3 槲皮素標準品
500mg Pyrvinium Pamoate 3546-41-6 雙羥萘酸撲蟯寧標準品
500mg Pyruvic Acid 127-17-3 丙酮酸標準品
500mg Pyran Pamoate 22204-24-6 雙羥萘酸噻嘧啶標準品
500mg Purified Guggul Extract 純化香膠樹提取物標準品
500mg Propylene Glycol Dilaurate 22788-19-8 丙二醇二月桂酸酯標準品
500mg Promethazine Hydrochloride 58-33-3 鹽酸異丙嗪標準品
500mg Prednisolone Sodium Phosphate 125-02-0 潑尼松龍磷酸鈉標準品
500mg Prazosin Hydrochloride 19237-84-4 鹽酸哌唑嗪標準品
原代細胞
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