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上海莼試生物技術有限公司
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分享原代細胞侵襲實驗

時間:2017-10-27閱讀:218
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原代細胞實驗簡介
腫瘤細胞侵襲能力檢測在腫瘤學(遷移、侵襲)和免疫學(遷移、趨化)中是常規實驗。
1.侵襲是細胞遷移的一種。細胞遷移分三種類型:趨觸、趨化和侵襲。
2.腫瘤細胞的侵襲性是腫瘤相關信號通路、藥物治療、靶向治療、致癌/抑癌基因等腫瘤學研究的一個重要指標。
3.免疫細胞具有趨化性,例如粒細胞、巨噬細胞、單核細胞對CCL、CXCL類因子的趨化性,免疫細胞異常(如過度趨化)通常會引起一些炎癥類疾病如風濕、關節炎、牛皮蘚、動脈粥樣化等。
具體操作
以配合24孔板的8μM PET膜Millicell 懸掛式細胞培養小室(cat#MCEP24H48)為例,實驗周期:3-5天
1.復蘇代數靠前的腫瘤細胞,在含有10% FBS的培養基 中預先培養2-3代,待細胞匯合達到80%左右,饑餓處 理18-24小時。
2.準備鋪膠:
a) 4 °C溶EMC膠過夜。
b) 將細胞小室、培養板和槍頭等于4°C 預冷。
c)用無血清的冷培養基稀釋ECM膠至20ug/mL,以5-10ug/cm2的密度加入到細胞小室的上層(按照ECM產品說明書的推薦比例和體積),輕輕搖晃使膠均勻鋪在膜上。以上操作在冰上進行。
d)立即將鋪好ECM膠的細胞小室置于培養板中,于37℃孵育1小時,ECM膠可由液體凝成固體,吸走多余的或者未凝的膠。
3.細胞用PBS清洗一次,EDTA或者0.05%胰酶消化,然后用包含5% BSA的無血清培養基中和,1500rpm離心5-10min。
4.用無血清培養基重懸細胞,調整細胞密度至0.5-2.0 x106cell/ml。
5.取上述200μL細胞液加入小室,下室(培養板)加入900L含有10% FBS的培養基。不同規格的小室和培養板所加的體積不同,具體參考Millicell R 產品說明書以配合24孔板的8μM PET膜Millicell 懸掛式細胞培養小室(cat#MCEP24H48)為例,實驗周期:3-5天
6. 37 ℃孵育24至72小時,依據腫瘤細胞類型而定。
7.孵育結束,小心取出細胞小室,吸掉小室上層培 養液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固 定5min,0.5%結晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色 20min,然后進行第8步或者第9步。
8. PBS清洗兩次以去除多余的染料,立即用棉簽擦 去濾膜上層的細胞,自然靜置風干。顯微鏡下觀察 濾膜下層的細胞,隨機選取不同的視野計數并算平均值。
9. 原代細胞結晶紫溶解濾膜下層細胞,然后用33%醋酸脫色, 將結晶紫*洗脫下來,洗脫液可在酶標儀上570 nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細。
150541-0210    320ng/支    免疫測定用
150542-0004    800ng/661IU/支    免疫測定用
150543-0004    150ng/支    免疫測定用
150544-200702    0.5ml/支    免疫測定用
150550-0004    50ng/支    免疫測定用
150551-0004    1000ng/支    免疫測定用
150552-0004    23ng/支    免疫測定用
150553-9911    21ng/支    免疫測定用
150554-9604    19ng/支    免疫測定用
150555-9003    22.8IU/支    免疫測定用
150556-200601    4000IU/支    免疫測定用
 原代細胞

 

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