一、細胞株原理

細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。

單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。

測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞 計數法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。

BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養基后，可做為細胞DNA復制的原料，經過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經歷了三個周期，則染色體中約一半為兩條單體均淺染，另一半為一深一淺。細胞 如果僅經歷了一個周期，則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例，就可算出細胞周期的值。

細胞周期的測定原理與操作步驟
二、儀器、用品與試劑

1、儀器、用品：同常規細胞培養

2、試劑：BrdU(1.0mg/ml)，甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液

三、操作步驟

1、細胞生長至指數期時，向培養液中加入BrdU，使Z終濃度為10μg/ml。

2、44小時加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。

3、48小時后常規消化細胞至離心管中，注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。

4、常規染色體制片。

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。

6、棄去2×SSC液，流水沖洗。

7、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干。

8、鏡檢100個分裂相，計*、二、三、四細胞期分裂指數。

9、計算：

細胞株周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時)

附：

(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克，檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。
*    PBS，（10X）    pH 7.4    70011-044    500ml
*    RPMI 1640，（1X），液體（IVD）    含L-谷氨酰胺    11875-093    500ml 
*    RPMI 1640，（1X），液體（IVD）    含25mM HEPES，和L-谷氨酰胺    22400-089    500ml
*    "RPMI 1640，干粉
（IVD）"    含L-谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉    31800-022    10*1L
*            31800-089    1*10L
*    "RPMI 1640，干粉
（IVD）"    含L-谷氨酰胺，25mM HEPES，不含碳酸氫鈉    23400-021    10*1L
*    RPMI 1640，（1X），液體 （ IVD）    不含L-谷氨酰胺    21870-076    500ml
細胞株