當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>公司動態>>為什么要進行細胞株凍存?
細胞株凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。
除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。
采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。
細胞凍存的步驟
(1)選擇處于對數生長期的細胞,在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘)。
(2)去上清液,加入含20%小牛血清的*培養基,于4℃預冷15分鐘后,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為5×106~1×107/mL之間。(凍存培養液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具體要看培養的細胞類型來選擇,像有些科研君們就用corning胎牛血清,也有人用sigma的小牛血清)
(3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中,每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱和凍存日期,同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數)。凍存管是長什么樣子的?我們一起
(4)將裝好細胞株的凍存管放到凍存盒中,-80℃冰箱過夜。;如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后轉到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。(凍存盒和程序降溫盒長啥樣。
(5)細胞凍存在液氮中可以長期保存,但為妥善起見,凍存半年后,取出一只凍存管細胞復蘇培養,觀察生長情況,然后再繼續凍存。
進口/國產 常溫,避光 規格: 含量測定 青陽參苷元 20mg
進口/國產 常溫,避光 規格: 西紅花苷-Ⅱ 20mg
進口/國產 常溫,避光 規格: 含量測定 重樓皂苷Ⅱ 20nm
進口/國產 常溫,避光 規格: 含量測定 重樓皂苷Ⅵ 10mg
進口/國產 常溫,避光 規格: 含量測定 重樓皂苷Ⅶ 10mg
進口/國產 常溫,避光 規格: 鑒別 總銀杏酸(套) 30mg
進口/國產 常溫,避光 規格: 含量測定 胡黃連苷-Ⅱ 20mg
細胞株
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