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貨號(hào)	GOY-01S6322

商品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)	輔酶ⅠNAD(H)含量可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒
規(guī)格	50管/24樣
檢測(cè)方法	可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)	GOY-01S6322

商品介紹：

測(cè)定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過(guò)PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

果糖1,6二磷酸(FDP)測(cè)試盒果糖1,6二磷酸(FDP)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

3磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒 3磷酸甘油酸激酶(PGK)微量法檢測(cè)試劑盒

3磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒 3磷酸甘油酸激酶(PGK)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）測(cè)試盒磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）微量法檢測(cè)試劑盒

磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）測(cè)試盒磷酸丙糖異構(gòu)酶（TPI）紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)測(cè)試盒果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)微量法檢測(cè)試劑盒

果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)測(cè)試盒果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

葡萄糖6磷酸(6PG)測(cè)試盒葡萄糖6磷酸(6PG)微量法檢測(cè)試劑盒

葡萄糖6磷酸(6PG)測(cè)試盒葡萄糖6磷酸(6PG)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

酸性蛋白酶測(cè)試盒酸性蛋白酶微量法檢測(cè)試劑盒

酸性蛋白酶測(cè)試盒酸性蛋白酶可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

測(cè)試盒微量法檢測(cè)試劑盒

盒見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

氧化型/脫氫抗壞血酸（DHA）含量測(cè)試盒氧化型/脫氫抗壞血酸（DHA）含量紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

L半乳糖酸1,4內(nèi)酯脫氫酶(Gal LDH)測(cè)試盒 L半乳糖酸1,4內(nèi)酯脫氫酶(Gal LDH)微量法檢測(cè)試劑盒

L半乳糖酸1,4內(nèi)酯脫氫酶(Gal LDH)測(cè)試盒 L半乳糖酸1,4內(nèi)酯脫氫酶(Gal LDH)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

抗壞血酸氧化酶（AAO）測(cè)試盒抗壞血酸氧化酶（AAO）微量法檢測(cè)試劑盒

抗壞血酸氧化酶（AAO）測(cè)試盒抗壞血酸氧化酶（AAO）紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）測(cè)試盒抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）微量法檢測(cè)試劑盒

嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Eosinophil Chemotactic Factor (ECF) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1) 48T/96T Homo sapiens (Human)

趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Erythropoietin Receptor (EPOR) 48T/96T Homo sapiens (Human)

紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 48T/96T Homo sapiens (Human)

紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Erythropoietin (EPO) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

E選擇素(SELE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 48T/96T Homo sapiens (Human)

E選擇素(SELE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 48T/96T Homo sapiens (Human)

凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL) 48T/96T Homo sapiens (Human)

凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 1, Acidic (FGF1) 48T/96T Homo sapiens (Human)

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(FGF4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 4 (FGF4) 48T/96T Homo sapiens (Human)

粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Colony Stimulating Factor 2, Granulocyte Macrophage (GMCSF) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)

糖蛋白130(gp130)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glucoprotein 130 (gp130) 48T/96T Homo sapiens (Human)

糖蛋白130(gp130)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glucoprotein 130 (gp130) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Hepatocyte Growth Factor (HGF) 48T/96T Homo sapiens (Human)

細(xì)胞間粘附分子1(ICAM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Intercellular Adhesion Molecule 1 (ICAM1) 48T/96T Homo sapiens (Human)

細(xì)胞間粘附分子1(ICAM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Intercellular Adhesion Molecule 1 (ICAM1) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

細(xì)胞間粘附分子1(ICAM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Intercellular Adhesion Molecule 1 (ICAM1) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)

干擾素γ(IFNγ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Interferon Gamma (IFNg) 48T/96T Homo sapiens (Human)

輔肌動(dòng)蛋白α2(ACTN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Actinin Alpha 2 (ACTN2) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)

輔肌動(dòng)蛋白α2(ACTN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Actinin Alpha 2 (ACTN2) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

血小板激活因子(PAF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Platelet Activating Factor (PAF) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

子Ⅵ(F6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Coagulation Factor VI (F6) 48T/96T Homo sapiens (Human)

纖維蛋白原(FG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibrinogen (FG) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)

纖維蛋白原(FG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibrinogen (FG) 48T/96T Mus musculus (Mouse) (SST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Somatostatin (SST) 48T/96T Homo sapiens (Human) SST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Somatostatin (SST) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)

輔酶ⅠNAD(H)含量可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒SST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Somatostatin (SST) 48T/96T Mus musculus (Mouse)

操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。