細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

公司細胞現貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。

商品介紹：

使用方法：

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；

4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。

培養操作：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細甲磺酸乙脂突變誘導試劑盒  10次

純化線粒體ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

細胞ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

組織ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

ATP生物發光法細胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒  50次

細ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

真/酵母ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

植物ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

食物污染ATP生物發光法定量檢測試劑盒  50次

小鼠腓腸肌細胞疊氮鈉葡萄糖肉湯  進口、國產Azide Dextrose Broth用于鏈球菌的增菌培養250兔過氧化物體增殖物激活受體β(PPARβ)免疫試劑盒現貨供應

乙基紫疊氮鈉肉湯  進口、國產Ethyl Violet Azide Broth用于鏈球菌的增菌培養250兔過氧化物體增殖物激活受體α(PPARA)免疫試劑盒*直銷

KF鏈球菌瓊脂  進口、國產KF Streptococcus Agar用于鏈球菌的選擇性分離及計數（SN標準）100兔骨橋素(OPN)免疫試劑盒進口、組裝

LIM培養基進口、國產LIM Medium用于鏈球菌的分離培養(Japan方法)250兔骨鈣素/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒進口、分裝

BETA-SSA 瓊脂進口、國產BETA-SSA Agar用于鏈球菌的選擇性分離培養(ACUMEDIA方法)250兔骨保護素(OPG)免疫試劑盒現貨供應

改良Y培養基   進口、國產Agar Y，Modified用于分離小腸結腸炎耶爾森氏菌 （GB標準）250兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)免疫試劑盒*直銷

改良鹽緩沖液PSB  進口、國產Phosphate Saline Buffer,Modified用于小腸結腸炎耶爾森氏菌冷增菌培養 （GB標準）250兔干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒進口、組裝

ITC 肉湯進口、國產ITC Broth用于分離培養耶爾森氏菌(ISO方法)250兔鈣結合蛋白(CALB2)免疫試劑盒進口、分裝

CIN-1I培養基基礎    進口、國產Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar用于分離小腸結腸炎耶爾森氏菌 （GB標準）250兔兒茶胺(CA)免疫試劑盒現貨供應

營養肉湯（NB）進口、國產Nutrient Broth一般細菌培養,轉種,復壯,增菌等.也可用于消毒效果測定250兔多肽YY(PYY)免疫試劑盒*直銷