選擇ELISA試劑盒應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性全面評(píng)價(jià)。
產(chǎn)品名稱：大鼠泛素連接酶(E3/UBPL)elisa試劑盒
英文名稱：Rat E3/ubiquitin-protein ligase,E3/UBPL ELISA Kit
規(guī)格：48T/96T
保存： 2-8℃（頻繁使用時(shí)）；-20℃（長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）。
有效期： 6 個(gè)月(4℃)；12 個(gè)月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液
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具有如下優(yōu)點(diǎn)：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、性價(jià)比非常好，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
試劑配制：
1、酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
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注意事項(xiàng)：
1加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過(guò)多時(shí)，可分批次操作，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，避免交叉污染，用力不能過(guò)猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。
瘦素(LEP)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　微紫青霉　1g

瘦素(LEP)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種　25g

L選擇素(SELL)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　玉蕈、真姬菇　5g

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　里氏木霉　1g

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　黃傘(10號(hào))　1g

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　短波單胞菌屬　250mg

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　枯草芽孢桿菌　25g

巨噬細(xì)胞來(lái)源趨化因子(MDC)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　釀酒酵母　5g

抗平滑肌抗體(ASMA)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　>95.0%(GC)　紫帶擬迷孔菌　100g

組織蛋白酶K(CTSK)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　黑曲霉　1g

組織蛋白酶K(CTSK)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　球孢白僵菌　1g

組織蛋白酶K(CTSK)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　青枯假單胞菌　5g

組織蛋白酶K(CTSK)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　解脂亞羅酵母　25g

組織蛋白酶K(CTSK)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　釀酒酵母　5g

組織蛋白酶K(CTSK)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　地中海中間根瘤菌　25g

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP6)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　霍氏腸桿菌　5g

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP6)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　1M THF溶液　嗜鹽動(dòng)性球菌　25ml

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP6)(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　大腸埃希氏桿菌　1g
大鼠泛素連接酶(E3/UBPL)elisa試劑盒COLLAGEN I蛋白表達(dá)定量　CVB-IgM(Coxsackievirus B-Immunoglobulin M) 　300 ul

細(xì)胞COLLAGEN II蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀　CVB-IgG(Coxsackievirus B-Immunoglobulin G) 　100 ul

載玻片細(xì)胞COLLAGEN II蛋白表達(dá)熒光顯微鏡　ECHO-IgG(Enteric CytopathicOrphan virus-Immunoglobulin G) 　20 ul

冰凍切片組織COLLAGEN II蛋白表達(dá)熒光顯微鏡　ECHO-IgM(Enteric CytopathicOrphan virus-Immunoglobulin M) 　100 ul

石蠟切片組織COLLAGEN II蛋白表達(dá)熒光顯微鏡　HDV-IgM(Hepatitis D Virus-Immunoglobulin M) 　100 ul

載玻片細(xì)胞βCOLLAGEN II蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡　TOX-IgM(Toxoplasma-Immunoglobulin M) 　20 ul

冰凍切片組織COLLAGEN II蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡　TOX-IgG(Toxoplasma-Immunoglobulin G) 　100µl

石蠟切片組織COLLAGEN II蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡　EV71-IgG(Enterovirus 71-Immunoglobulin G) 　100 ul

細(xì)胞COLLAGEN II蛋白表達(dá)比色法定量　AS-IgG(anti sperm-Immunoglobulin G) 　100 ul

細(xì)胞COLLAGEN II蛋白表達(dá)熒光定量　EM-IgG(Endometrium-Immunoglobulin G) 　100 ul

COLLAGEN II蛋白表達(dá)西方雜交分析　A16-IgM(Coxsackie virus A16-Immunoglobulin M) 　100 ul

COLLAGEN II蛋白免疫共沉淀分析　EV71-IgM(Enterovirus 71-Immunoglobulin M) 　100 ul

COLLAGEN II蛋白表達(dá)定量　HCG-IgG(chorionic gonadotropin-Immunoglobulin G) 　100 ul

脘蛋白基因變異分析　HP-IgG(Helicobcter Pylori-Immunoglobulin G) 　20 ul

活體細(xì)胞脘蛋白去糖基化　EM-IgG(Endometrium-Immunoglobulin G) 　100 ul

體外脘蛋白去糖基化　HCG-IgG(chorionic gonadotropin-Immunoglobulin G) 　100 ul
操作流程如下：
（1）僅用于科研待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。