組成及試劑配制:
1、腸道病毒EV71核酸檢測試劑盒圖片品牌酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。

CRAT/CAT1 ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體肉毒堿O-乙酰基轉(zhuǎn)移酶(CRAT/CAT1)ELISA試劑盒

lyso-PAF ELISA Kit血管緊縮素樣蛋白1抗體溶血血小板活化因子(lyso-PAF)ELISA試劑盒

Hc ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白7抗體溶血補(bǔ)體(Hc)ELISA試劑盒

HLAMP-2 ELISA Kit炭疽毒素受體2抗體溶酶體相關(guān)膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA試劑盒

LZM ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白4C抗體溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒

β-HCG ELISA Kit自噬蛋白5/細(xì)胞凋亡的特異性蛋白抗體絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)ELISA試劑盒

β-CG ELISA Kit芳基硫酸酯酶A抗體絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒

HCG ELISA Kit擬南芥ACA11抗體絨毛膜促性腺激素(HCG)ELISA試劑盒

PAPP-A ELISA KitAHA3抗體相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒

PAPP-A ELISA Kit磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體相關(guān)蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒

PSPB ELISA Kit磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體特異性蛋白B(PSPB)ELISA試劑盒

PSG4 ELISA Kit中性膽固醇酯水解酶1抗體特異性β1糖蛋白4(PSG4)ELISA試劑盒

SP1/PSβ1-G ELISA Kit人星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA試劑盒

HG ELISA Kit醛縮酶A抗體皰疹抗體(HG)ELISA試劑盒

HSF-1 ELISA Kit膜粘連蛋白6抗體熱休克因子1(HSF-1)ELISA試劑盒

HSP gp96 ELISA Kitβ淀粉樣肽抗體熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒

HSP-90 ELISA Kit血管緊張素I抗體熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒

HSP-72 ELISA Kit腎上腺髓質(zhì)素抗體熱休克蛋白72(HSP-72)ELISA試劑盒

HSP72 ELISA KitADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體熱休克蛋白72(HSP72)ELISA試劑盒

HSP-70 ELISA Kit精氨酸加壓素受體2抗體熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒

HSP70 ELISA Kit凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體熱休克蛋白70(HSP70)ELISA試劑盒

Hsp-60 ELISA Kit絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒

HSP60 ELISA Kit抗凝血酶3抗體熱休克蛋白60(HSP60)ELISA試劑盒

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。