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丙酮酸脫羧酶(PDC)紫外分光光度法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-24 11:51:21瀏覽次數:237次

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貨號 GOY-01S6338
丙酮酸脫羧酶(PDC)紫外分光光度法公司正在出售的產品:人橋粒芯糖蛋白-1(Dsg-1)ELISA Kit,48T/96T
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商品屬性:

產品名稱

丙酮酸脫羧酶(PDC)紫外分光光度法

規格

50管/48樣

檢測方法

紫外分光光度法

貨號

GOY-01S6338

商品介紹:

測定意義

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發酵的關鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液槍和雙蒸水。

實驗方法學:

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔510分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

2-溴-3-十二烷基噻吩 95%2,6-二氯苯肼鹽酸鹽 98%Anti-CK18/FITC  熒光素標記角蛋白18抗體IgG

三苯基膦醋酸鈀 Pd 14.2%2,6-二氟吡-3-酸 95%Anti-CK19/FITC  熒光素標記角蛋白19抗體IgG

1,4-雙(二苯基膦丁烷)二氯化鈀 98%3,4-二氯苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/Gold  膠體金離子標記角蛋白19抗體IgG

(乙)氯化鈀(II)  Pd 41.0%2-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/FITC  熒光素標記角蛋白19抗體IgG

(二苯基膦) 98%3-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/RBITC  紅色熒光素羅丹明標記角蛋白19抗體IgG

1,2-雙(二苯基膦)乙烷  98%6-氟吡-3-酸 96%Anti-CK20/FITC  熒光素標記角蛋白20抗體IgG

1,5-雙(二苯基膦)戊烷  97%2-氟吡-3-酸 97%Anti-CK34 BetaE12/FITC  熒光素標記高分子量角蛋白CK34βE12抗體IgG

1,6-雙(二苯基膦基)己烷  97%2-羥基-5-氟吡 97%Anti-CK-HMW/FITC  熒光素標記高分子量角蛋白抗體IgG

丙酮酸脫羧酶(PDC)紫外分光光度法D-3-氨 98%CCR-4(C-C chemokine receptor 4)  表面趨化因子受體4抗原猴組織蛋白B(CTSB)聯免疫吸附測定試劑盒

L-2-氨 97%CCR-6/CD196 peptide  表面趨化因子受體6抗原猴胰島素樣生長因子2-mRNA結合蛋白3(IGF2BP3)聯免疫吸附測定試劑盒

三氟磺釹 98%CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide  表面趨化因子受體6抗原猴重去素(NEB)聯免疫吸附測定試劑盒

三氟磺鎳(II) 96%CCR-7(CC chemokine receptor 7)  CC趨化因子受體7(多肽)猴Apelin蛋白(APLN)聯免疫吸附測定試劑盒

三氟磺鐠 98%CXCL10/IP-10  CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗原猴B分化因子(BCDF)聯免疫吸附測定試劑盒  

三氟磺 98%VEGF(Vascular endothelial growth factor)  血管內皮生長因子(多肽抗原)猴Bcl2關聯永生因3(BAG3)聯免疫吸附測定試劑盒

DL-4-溴氨 99%CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase)  CD10抗原猴原鈣黏素1(PCDH1)聯免疫吸附測定試劑盒

BOC-D-炔甘氨 95%ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1)  ZCWCC1抗原猴谷氨脫羧(GAD)聯免疫吸附測定試劑盒

BOC-D-3-(2-吡)-氨 99%CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor  CD105/轉化生長因子β受體抗原猴間隙連接蛋白31(CX31)聯免疫吸附測定試劑盒

FMOC-D-4-溴氨 95%CD138/Syndecan-1  多配體蛋白聚糖1抗原猴色素P450家族成員7A1(CYP7A1)聯免疫吸附測定試劑盒

L-烯甘氨 95%CD146/MCAM  黑色素瘤粘附分子CD146抗原猴蛋白17(Sp17)聯免疫吸附測定試劑盒

三氟磺鈉 98%ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)  氨肽N抗原猴半糖6硫酯(Gal-6S)聯免疫吸附測定試劑盒  

三氟磺銀(Ⅰ) 97%CD14(cluster of differentiation antigen 14)  CD14/內素受體抗原猴胱天蛋白12(Casp12)聯免疫吸附測定試劑盒

三氟磺釤 98%CD28  CD28抗原猴GATA結合蛋白3(GATA3)聯免疫吸附測定試劑盒

三銀 98%CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)  活化白粘附分子抗原猴血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)聯免疫吸附測定試劑盒

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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