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組成及試劑配制:
1、同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠家酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
同病毒綿羊膿皰病毒PCR檢測試劑盒廠家 | Ovine Ecthyma Virus(Orf)PCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數),振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環參數設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
PISD ELISA Kit表皮細胞表面抗原抗體1抗體磷脂酰絲氨酸脫羧酶(PISD)ELISA試劑盒
PSR ELISA Kit凝血因子9抗體磷脂酰絲氨酸受體(PSR)ELISA試劑盒
PTDSS2 ELISA Kit凝血因子10抗體磷脂酰絲氨酸合酶2(PTDSS2)ELISA試劑盒
PTDSS1 ELISA Kit凝血因子11輕鏈抗體磷脂酰絲氨酸合酶1(PTDSS1)ELISA試劑盒
PLCγ2 ELISA Kit凝血因子12重鏈抗體磷脂酰肌醇特異性磷酯酶Cγ2(PLCγ2)ELISA試劑盒
PLCβ3 ELISA KitFIGNL1蛋白抗體磷脂酰肌醇特異性磷酯酶Cβ3(PLCβ3)ELISA試劑盒
PLCβ1 ELISA KitFAM70A蛋白抗體磷脂酰肌醇特異性磷酯酶Cβ1(PLCβ1)ELISA試劑盒
PICALM ELISA Kit含纖維蛋白原C結構域蛋白1抗體磷脂酰肌醇結合網格蛋白裝配蛋白(PICALM)ELISA試劑盒
GPC6 ELISA KitF-box蛋白相關蛋白6抗體磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(GPC6)ELISA試劑盒
GPC5 ELISA Kit磷酸化成纖維細胞生長因子受體底物2抗體磷脂酰肌醇蛋白聚糖5(GPC5)ELISA試劑盒
GPC4 ELISA Kit椎骨蛋白2抗體磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(GPC4)ELISA試劑盒
GPC3 ELISA Kit凝血因子VII磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)ELISA試劑盒
GPC2 ELISA Kit凝血因子10抗體磷脂酰肌醇蛋白聚糖2(GPC2)ELISA試劑盒
GPC1 ELISA Kit脆性X綜合征相關蛋白AFF2抗體磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)ELISA試劑盒
PGS1 ELISA Kit肌側索硬化癥相關蛋白FGGY抗體磷脂酰甘油磷酸合酶1(PGS1)ELISA試劑盒
PA ELISA Kit肌側索硬化癥相關蛋白FIG4抗體磷脂酸(PA)ELISA試劑盒
PLSCR5 ELISA Kit黃素腺嘌呤二核苷酸抗體磷脂爬行酶5(PLSCR5)ELISA試劑盒
PLSCR4 ELISA Kit甲酰肽受體3抗體磷脂爬行酶4(PLSCR4)ELISA試劑盒
PLSCR3 ELISA Kit兜甲蛋白抗體磷脂爬行酶3(PLSCR3)ELISA試劑盒
PLSCR2 ELISA Kit脂肪堆積和肥胖相關蛋白抗體磷脂爬行酶2(PLSCR2)ELISA試劑盒
PLD6 ELISA Kit鳥嘌呤核苷酸交換因子FARP2抗體磷脂酶D6(PLD6)ELISA試劑盒
PLD5 ELISA KitFK506結合蛋白相關蛋白抗體磷脂酶D5(PLD5)ELISA試劑盒
PLD4 ELISA Kit成纖維細胞生長因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體磷脂酶D4(PLD4)ELISA試劑盒
PLD3 ELISA Kit鈣粘蛋白家族成員7抗體磷脂酶D3(PLD3)ELISA試劑盒
PLD ELISA KitⅢ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體磷脂酶D(PLD)ELISA試劑盒
PLB ELISA Kit細絲蛋白A抗體磷脂酶B(PLB)ELISA試劑盒
PLA2R1 ELISA Kit磷酸化細絲蛋白A抗體磷脂酶A2受體1(PLA2R1)ELISA試劑盒
PLAA ELISA Kit磷酸化細絲蛋白A抗體磷脂酶A2激活蛋白(PLAA)ELISA試劑盒
PLA1 ELISA KitDNA損傷修復基因XRCC9抗體磷脂酶A1(PLA1)ELISA試劑盒
PHPT1 ELISA Kit磷酸化細絲蛋白A抗體磷酸組氨酸性磷酸酶1(PHPT1)ELISA試劑盒
Php ELISA Kit磷酸化磷酸神經膜抗體磷酸組氨酸(Php)ELISA試劑盒
PCK1 ELISA Kit磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)ELISA試劑盒
PSAT1 ELISA Kit磷酸化磷酸神經膜抗體磷酸絲氨酸轉氨酶1(PSAT1)ELISA試劑盒
PSPH ELISA Kit叉頭蛋白N1抗體磷酸絲氨酸性磷酸酶(PSPH)ELISA試劑盒
PLM ELISA Kit磷酸化DNA損傷修復基因XRCC9抗體磷酸神經膜蛋白(PLM)ELISA試劑盒
PGD ELISA KitⅢ型纖維連接蛋白域蛋白1抗體磷酸葡萄糖脫氫酶(PGD)ELISA試劑盒
PTEN ELISA KitⅢ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)ELISA試劑盒
PMVK ELISA KitⅢ型纖維連接蛋白域蛋白3B抗體磷酸甲羥戊酸激酶(PMVK)ELISA試劑盒
PIK3Cδ ELISA Kit粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體磷酸肌醇-3-激酶催化亞基δ肽(PIK3Cδ)ELISA試劑盒
PIK3Cβ ELISA Kit細胞生長抑制蛋白26/前列腺特異性膜抗原抗體樣蛋白抗體磷酸肌醇-3-激酶催化亞基β肽(PIK3Cβ)ELISA試劑盒
PI3K2α ELISA Kit腎母細胞瘤基因X染色體蛋白抗體磷酸肌醇-3-激酶2α肽(PI3K2α)ELISA試劑盒
PFAS ELISA Kit磷酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體磷酸核糖甲酰甘氨酸脒合酶(PFAS)ELISA試劑盒
GART ELISA Kit腎母細胞瘤X蛋白抗體磷酸核糖甘氨酰胺轉甲酰基酶(GART)ELISA試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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