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西方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒品牌

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更新時間:2019-04-18 11:33:06瀏覽次數(shù):231次

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適用領(lǐng)域 科研
西方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒品牌:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

組成及試劑配制:
1、西方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒品牌酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

產(chǎn)品名稱英文名稱價格
西方蜜蜂微孢子蟲PCR檢測試劑盒品牌Abalone Spherical VirusPCR電詢


樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標(biāo)本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后,密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫(yī)療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應(yīng)管數(shù)),振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
4. PCR擴增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃,反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。

CHAD ELISA Kit大腸桿菌埃希桿菌O6抗體軟骨粘附素(CHAD)ELISA試劑盒
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LDHB ELISA Kit真核延伸因子激酶2抗體乳酸脫氫酶B(LDHB)ELISA試劑盒
CPT2 ELISA Kit磷酸化真核延伸因子激酶2抗體肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶2(CPT2)ELISA試劑盒
CPT1B ELISA Kit真核啟動因子2α抗體肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1B(CPT1B)ELISA試劑盒
CPT1A ELISA Kit磷酸化一氧化氮合成酶3抗體肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A(CPT1A)ELISA試劑盒
CT2 ELISA Kit真核翻譯延長因子2抗體肉毒堿轉(zhuǎn)運蛋白2(CT2)ELISA試劑盒
CRAT ELISA Kit癌基因ERG3抗體肉毒堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(CRAT)ELISA試劑盒
CORT ELISA Kit豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K88-K99抗體肉毒堿-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(CORT)ELISA試劑盒
FUS ELISA KitFAS凋亡抑制分子3抗體融合蛋白(FUS)ELISA試劑盒
SLC3A2 ELISA Kit纖維束1抗體溶質(zhì)載體家族3成員2(SLC3A2)ELISA試劑盒
SLC39A6 ELISA Kit叉頭蛋白P3抗體溶質(zhì)載體家族39成員6(SLC39A6)ELISA試劑盒
SLC30A8 ELISA Kit免疫球蛋白G Fc段受體I溶質(zhì)載體家族30成員8(SLC30A8)ELISA試劑盒
SLC26A4 ELISA Kit叉頭蛋白M1抗體溶質(zhì)載體家族26成員4(SLC26A4)ELISA試劑盒
SLC1A5 ELISA Kit磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體溶質(zhì)載體家族1成員5(SLC1A5)ELISA試劑盒
SLC16A3 ELISA Kit磷酸化粘著斑激酶抗體溶質(zhì)載體家族16成員3(SLC16A3)ELISA試劑盒
SLC16A1 ELISA Kit絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體溶質(zhì)載體家族16成員1(SLC16A1)ELISA試劑盒
LPCAT4 ELISA Kit肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶4(LPCAT4)ELISA試劑盒
LPCAT3 ELISA Kit凝血因子13抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶3(LPCAT3)ELISA試劑盒
LPCAT2 ELISA Kit濾泡樹突細(xì)胞分泌蛋白抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶2(LPCAT2)ELISA試劑盒
LPCAT1 ELISA Kit纖維母細(xì)胞生長因子13抗體溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶1(LPCAT1)ELISA試劑盒
LPEAT1 ELISA Kit骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體溶血磷脂酰乙醇胺酰基轉(zhuǎn)移酶1(LPEAT1)ELISA試劑盒

 

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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