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組成及試劑配制:
1、肉色諾卡菌PCR檢測試劑盒品牌酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
產品名稱 | 英文名稱 | 價格 |
肉色諾卡菌PCR檢測試劑盒品牌 | Abalone Spherical VirusPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管(含0.4ml滅菌生理鹽水),用無菌棉球將試管塞緊后,密閉送檢。標本可立即用于檢測,也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化(取得醫療器械許可證)的RNA提取試劑盒處理標本,具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l樣品置于1.5ml 離心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次; 13000rpm離心15min, 吸取上層液體,加入等體積異丙醇,顛倒混勻室溫靜置10min, 13000rpm離心10min,輕輕倒去上清;加入700?l 75%乙醇,顛倒洗滌,13000rpm離心5min,輕輕倒去上清,倒置于吸水紙上,棄盡液體或4000rpm離心5sec,將管壁上的殘余液體甩到管底部,用微量加樣器盡量吸干液體,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶(n為反應管數),振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中,然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中,蓋好管蓋,立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上,推薦循環參數設置:
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循環45次;單點熒光檢測在60℃,反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇:選用FAM通道。
PTEN ELISA KitⅢ型纖維連接蛋白域蛋白8抗體磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)ELISA試劑盒
PMVK ELISA KitⅢ型纖維連接蛋白域蛋白3B抗體磷酸甲羥戊酸激酶(PMVK)ELISA試劑盒
PIK3Cδ ELISA Kit粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體磷酸肌醇-3-激酶催化亞基δ肽(PIK3Cδ)ELISA試劑盒
PIK3Cβ ELISA Kit細胞生長抑制蛋白26/前列腺特異性膜抗原抗體樣蛋白抗體磷酸肌醇-3-激酶催化亞基β肽(PIK3Cβ)ELISA試劑盒
PI3K2α ELISA Kit腎母細胞瘤基因X染色體蛋白抗體磷酸肌醇-3-激酶2α肽(PI3K2α)ELISA試劑盒
PFAS ELISA Kit磷酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體磷酸核糖甲酰甘氨酸脒合酶(PFAS)ELISA試劑盒
GART ELISA Kit腎母細胞瘤X蛋白抗體磷酸核糖甘氨酰胺轉甲酰基酶(GART)ELISA試劑盒
PAICS ELISA Kitα-L巖藻糖苷酶抗體磷酸核糖胺咪唑羧化酶(PAICS)ELISA試劑盒
PGK2 ELISA KitFbxW2蛋白抗體磷酸甘油酸酯激酶2(PGK2)ELISA試劑盒
PGK1 ELISA KitFbxw7蛋白抗體磷酸甘油酸酯激酶1(PGK1)ELISA試劑盒
PHGDH ELISA KitFBXW8蛋白抗體磷酸甘油酸脫氫酶(PHGDH)ELISA試劑盒
PGAM5 ELISA Kit人纖維蛋白原單克隆抗體磷酸甘油酸變位酶5(PGAM5)ELISA試劑盒
PGAM4 ELISA KitFANCD2抗體磷酸甘油酸變位酶4(PGAM4)ELISA試劑盒
PGAM1 ELISA Kit磷酸化FANCD2抗體磷酸甘油酸變位酶1(PGAM1)ELISA試劑盒
PMM2 ELISA Kit細胞外基質蛋白FREM2抗體磷酸甘露糖酶1(PMM2)ELISA試劑盒
PMM1 ELISA Kit面肩肱型肌營養不良癥相關蛋白FRG1抗體磷酸甘露糖酶1(PMM1)ELISA試劑盒
PPCDC ELISA KitCD350抗體磷酸泛酰半胱氨酸脫羧酶(PPCDC)ELISA試劑盒
PPCS ELISA KitCD344抗體磷酸泛酰半胱氨酸合成酶(PPCS)ELISA試劑盒
PDE9A ELISA Kit卷曲蛋白6抗體磷酸二酯酶9A(PDE9A)ELISA試劑盒
PDE8B ELISA Kit卷曲蛋白8抗體磷酸二酯酶8B(PDE8B)ELISA試劑盒
PDE8A ELISA KitFSD1蛋白抗體磷酸二酯酶8A(PDE8A)ELISA試劑盒
PDE7B ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白10抗體磷酸二酯酶7B(PDE7B)ELISA試劑盒
PDE7A ELISA KitPrader-Willi綜合征相關蛋白抗體磷酸二酯酶7A(PDE7A)ELISA試劑盒
PDE4D ELISA KitAKT相互作用蛋白蛋白抗體磷酸二酯酶4D(PDE4D)ELISA試劑盒
PDE12 ELISA KitDNA解旋酶V抗體磷酸二酯酶12(PDE12)ELISA試劑盒
PDE11A ELISA Kit遠端上游元件結合蛋白3抗體磷酸二酯酶11A(PDE11A)ELISA試劑盒
PDE10A ELISA Kit巖藻糖變旋酶抗體磷酸二酯酶10A(PDE10A)ELISA試劑盒
Lptn ELISA KitX三體綜合征相關蛋白FUNDC1抗體淋巴細胞趨化因子(Lptn)ELISA試劑盒
LY96 ELISA Kit弗林蛋白酶抗體淋巴細胞抗原96(LY96)ELISA試劑盒
LY9 ELISA Kit富含絲氨酸/精氨酸重復結構蛋白抗體淋巴細胞抗原9(LY9)ELISA試劑盒
LY86 ELISA Kit巖藻糖基轉移酶6抗體淋巴細胞抗原86(LY86)ELISA試劑盒
LY75 ELISA Kit巖藻糖基轉移酶7抗體淋巴細胞抗原75(LY75)ELISA試劑盒
LFA3 ELISA Kit眼睛和頭發顏色相關蛋白FUZ抗體淋巴細胞功能關聯抗原3(LFA3)ELISA試劑盒
LFA2 ELISA Kit濾泡型轉運蛋白1/II型慢性淋巴性白血病抗體淋巴細胞功能關聯抗原2(LFA2)ELISA試劑盒
LFA1α ELISA Kit磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體淋巴細胞功能關聯抗原1α(LFA1α)ELISA試劑盒
LCP2 ELISA KitFAM65B蛋白抗體淋巴細胞胞漿蛋白2(LCP2)ELISA試劑盒
LCP1 ELISA Kit胞外分泌型絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶FAM20C抗體淋巴細胞胞漿蛋白1(LCP1)ELISA試劑盒
LTβR ELISA Kit凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關抗原抗體抗體淋巴毒素β受體(LTβR)ELISA試劑盒
LTβ ELISA Kit纖維母細胞生長因子受體底物3抗體淋巴毒素β(LTβ)ELISA試劑盒
LNPEP ELISA Kit纖維連接蛋白抗體亮氨酰/半胱氨酰氨肽酶(LNPEP)ELISA試劑盒
LRRK2 ELISA KitFCHO1蛋白抗體亮氨酸豐富重復激酶2(LRRK2)ELISA試劑盒
LGI3 ELISA Kit磷酸化脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白亮氨酸豐富重復LGI家族成員3(LGI3)ELISA試劑盒
LRRFIP1 ELISA Kit脂肪酸結合蛋白12抗體亮氨酸豐富重復FLII相互作用蛋白1(LRRFIP1)ELISA試劑盒
LRG1 ELISA Kit四連接同源蛋白FJX1抗體亮氨酸豐富α2-糖蛋白1(LRG1)ELISA試劑盒
AMPH ELISA KitG蛋白偶聯受體γ3抗體兩性蛋白(AMPH)ELISA試劑盒
SYCP3 ELISA KitG蛋白偶聯受體γ7抗體聯會復合體蛋白3(SYCP3)ELISA試劑盒
GMNN ELISA KitG蛋白結合蛋白α13/Gα13抗體聯會蛋白(GMNN)ELISA試劑盒
TELE ELISA KitG蛋白結合蛋白α16/Gα16抗體連續蛋白(TELE)ELISA試劑盒
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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