實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    小鼠肝內膽管上皮細胞

2.組織來源：肝臟組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠肝內膽管上皮細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。通過控制激素調控的分泌和吸收，在保持、調整和擴大膽小管的結構中發揮重要作用，肝內膽管上皮細胞在先天性和獲得性免疫應答方面起著積極作用。肝內膽管上皮細胞約占肝細胞總數的5%，其在肝內膽道系統內形成復雜的網狀管形結構。肝內膽管上皮細胞具有復雜的生理代謝功能，參與肝臟的代謝、排泌、免疫等生理過程，在肝臟疾病的發生發展過程中起一定的作用。研究表明，常見的肝內膽管病變例如原發性硬化性膽管炎、膽管癌等疾病，都是以肝內膽管上皮細胞為病變靶位，進而引起肝內膽管上皮損傷。因此，了解正常肝內膽管上皮細胞的生物學特征和病變肝內膽管上皮細胞的病理特征對研究肝內膽管病變的發病機制、診斷和治療具有重要意義。

5.方法簡介：

()實驗室分離的小鼠肝內膽管上皮細胞采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯合消化，接種至預先包被鼠尾膠原的培養瓶中，通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的小鼠肝內膽管上皮細胞經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-M038

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

10次 百萬堿基級動物DNAout   78-5000 pg/mL ELISA Kit for Angiotensin II

2 ug pECFP-MEM pECFP-MEM 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Peroxisome proliferator-activated receptor delta

改良鹽緩沖液PSB Phosphate Saline Buffer,Modified 250g 7.8-500 ng/mL ELISA Ki

小鼠肝內膽管上皮細胞phospho-C3(Tyr181)  磷酸化瘤易候選基因3抗體 規格: 0.1ml

20µL COX IV兔單抗 COX IV Rabbit MAb -20℃保存

1瓶 U27細胞株 U27 低溫運輸和保存

1000支 10 μL RNase-free白吸頭（袋裝帶芯長尖）  常溫

100µL 小鼠抗T7標簽單抗 Anti T7-Tag Mouse MAb -20℃保存

2 ug pHR pHR 低溫運輸，-20℃保存

60g/L氯化鈉蛋白胨肉湯 60g%/L NaCl Peptone Water 250g

100次 總肽過氧化物檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

2 ug pTrcHis B pTrcHis B 低溫運輸，-20℃保存

鈉瓊脂基礎 NaHCO3 Agar Base 250g

JAM1  連接粘附分子1抗體 規格: 0.1mlWNT4  信號通路Wnt4抗體 規格: 0.2ml

MYPT1/MBS  肌球蛋酸抗體 規格: 0.1ml