組成及試劑配制:
1、萊氏無膽甾原體PCR檢測試劑盒規格酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運輸：
1、萊氏無膽甾原體PCR檢測試劑盒規格樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
萊氏無膽甾原體PCR檢測試劑盒規格人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球將試管塞緊后，密閉送檢。標本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應管數）,振蕩混勻數秒, 3000rpm離心數秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進行PCR擴增反應。
4. PCR擴增反應管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環參數設置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環45次;單點熒光檢測在60℃，反應體系為25?l。
熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。
血管生成素相關蛋白6抗體89-78-1HPLC≥98%20mg/支DL-薄荷醇

Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體2216-51-5HPLC≥98%20mg/支薄荷醇

酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體18642-23-4HPLC≥98%20mg/支補骨脂定

脂肪酰輔酶A家族成員1抗體19879-32-4HPLC≥98%20mg/支補骨脂二氫黃酮

芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體19879-30-2HPLC≥99%21mg/支補骨脂二氫黃酮醚

磷酸化芳香胺N-酰化轉移酶抗體10309-37-2HPLC≥98%20mg/支補骨脂酚

肌動蛋白結合蛋白1抗體53947-92-5HPLC≥98%20mg/支補骨脂寧

粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體66-97-7HPLC≥98%20mg/支補骨脂素

肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體55290-63-6HPLC≥98%20mg/支蒼術素

AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調蛋白28抗體107668-79-1HPLC≥98%20mg/支草烏素
萊氏無膽甾原體PCR檢測試劑盒規格100 unitsEndonuclease IV, E.coli100 units

1000 unitsRNase I1000 units

5000 unitsRNase I5000 units

2500 unitsRiboLock™ RNase Inhibitor2500 units

4x2500 unitsRiboLock™ RNase Inhibitor4x2500 units

24x2500 unitsRiboLock™ RNase Inhibitor24x2500 units

100 unitsAgarase100 units

500 unitsDNA Polymerase I500 units

2500 unitsDNA Polymerase I2500 units

300 unitsKlenow Fragment300 units

1500 unitsKlenow Fragment1500 units
反應五要素:
萊氏無膽甾原體PCR檢測試劑盒規格參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。