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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
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BCA蛋白法含量微量法檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2022-04-28 10:08:13瀏覽次數(shù):323次

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貨號(hào) GOY-01S6968
BCA蛋白法含量微量法檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:活體細(xì)胞半胱蛋白13(PASE-13)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒 20次
冰凍切片半胱蛋白13(PASE-13)活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒 50次
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冰凍切片半胱蛋白(PASE)總活性原位熒光染色檢測(cè)試劑盒 50次
組織蛋白(CATHEPSIN)活性原

28.png

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

BCA蛋白法含量微量法檢測(cè)試劑盒

規(guī)格

100管/96樣

檢測(cè)方法

微量法

貨號(hào)

GOY-01S6968

商品介紹:

測(cè)定意義

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測(cè)定原理:

堿性條件下,蛋白質(zhì)中半、、、以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCA與Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰*。

自備儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血35ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔510分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

鉬酸銨,四水  用于和昆蟲培養(yǎng), 81-83% as MoO3丹參酮I  分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Melamine  三聚抗體

鉬酸銨 SP 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Melan-A/MART-1/Melanoma HMB45  黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體

鉬酸銨 99.9% metals basis ≥98% (HPLC)Anti-MEK1/MAPKK1/MEKK1  MEK1/MAPKK1抗體(N-端)

鉬酸銨,四水 ACS, 81-83% as MoO33,3’-二沒(méi)食子酸酯茶黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥98.0% (HPLC)Anti-Menin/Men1  Menin抑癌蛋白抗體

苯肼 AR,98.0%知母皂苷A-Ⅲ 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%Anti-Metal ion transporter  擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體

苯肼 CP,96.0%細(xì)辛 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Mfn1  線粒體融合蛋白1抗體

鎢酸鈉 AR,99.5%四氫巴馬汀 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-MGMT  O6甲基DNA甲基轉(zhuǎn)移抗體

鎢酸鈉 CP,99.0%香蒲新苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Metallothionein  金屬硫蛋白抗體

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操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。


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