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貨號 | GOY-01X1112 |
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細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
公司細胞現貨供應,質量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 大鼠神經星形膠質細胞 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1112 |
商品介紹:
名稱 大鼠神經星形膠質細胞 2.組織來源:腦組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 大鼠神經星形膠質細胞分離自腦組織;大腦分左右兩個半球,大腦皮質(灰質)覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面,即外側面(約占整個皮質面積的1/3)、內側面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積;大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔,使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經星形膠質細胞,是哺乳動物腦內分布*泛的一類細胞,也是膠質細胞中體積最大的一種。用經典的金屬浸鍍技術(銀染色)顯示此類膠質細胞呈星形,從胞體發出許多長而分支的突起,伸展充填在神經細胞的胞體及其突起之間,起支持和分隔神經細胞的作用。細胞突起的末端常膨大形成腳板或稱終足,有些腳板貼附在鄰近的毛細血管壁上,因此這些腳板又被稱為血管足或血管周足,靠近腦脊髓表面的腳板則附著在軟膜內表面,彼此連接構成膠質界膜。細胞剛分離時呈圓形,24h后大部分細胞貼壁,均勻分布于瓶底,部分細胞伸出細小突起,培養4-5d后細胞數量明顯增多,呈扁平、多角形,胞質豐富且核漿較少,細胞核呈橢圓形,偏于胞體一側。神經星形膠質細胞是中樞神經系統的重要細胞組成,不僅具有支持功能,還能夠合成及分泌多種神經活性物質,在維持神經元內外環境、生存、遷移、免疫調節、信號轉導、軸突生長及功能整合等方面具有重要作用。 5.方法簡介: ()實驗室分離的大鼠神經星形膠質細胞采用酶消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的大鼠神經星形膠質細胞經GFAP免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R137 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性可傳5代左右;3代以內狀態最佳 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中培養;
4) 待細胞*貼壁后,培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
50µg Xa因子蛋白 Factor Xa Protease -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人己糖激3(HK3)ELISA試劑盒
125mL RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),pH8.0 RNase-Free TE Buffer,pH8.0 常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人肥胖抑制素(OB)ELISA試劑盒
1瓶 2V6.11細胞株 2V6.11 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human
大鼠神經星形膠質細胞IL-21R 白介素21受體抗體 規格: 0.2ml
C21ORF56 21號染色體開放閱讀框56抗體 規格: 0.2ml
NMDA-NR1/NR1/NMDAR1 天冬氨酸受體抗體 規格: 0.1mlMIER2 中胚層誘導早期反應蛋白2抗體 規格: 0.2ml
CK15 細胞角蛋白15抗體 0.1ml
50T 輪狀病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
ARH/LDL receptor adaptor protein 脂蛋白受體銜接蛋白抗體 規格: 0.2ml
FBXO11 F-box蛋白家族FBXO11抗體 規格: 0.2ml
TRIM31 環指蛋白HCG1抗體 規格: 0.2ml
SERPINB12 蛋白抑制劑B12抗體 規格: 0.2ml
phospho-MAP4(Ser941) 磷酸化微管相關蛋白4抗體 規格: 0.1mlRabbit Anti-dog IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗狗IgG 規格: 0.1ml
哥倫比亞血瓊脂平板(9cm) Columbia Blood Agar 5個/包
0.4mg無菌水溶液 0.4mg/支*20
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