實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    小氣道平滑肌細胞

2.組織來源：小氣道組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人小氣道平滑肌細胞分離自小氣道組織；臨床上通常將內徑小于2mm的小細支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小，但易阻塞的特點。在平靜吸氣時，空氣進入狹窄的鼻咽部，產生渦流。由于小氣道已無軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細胞形成連續(xù)呼吸道內層，作為隔絕外界有害物質的物理和功能屏障發(fā)揮著*的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細胞在功能上能夠調節(jié)免疫反應、產生化學因子進行宿主防御、表達粘附分子，并可能通過HLA-DR表達呈遞抗原；它們還能產生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病，如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細胞的破壞；小氣道上皮細胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。小氣道的生理功能特點：①小氣道阻力小；②氣流速度慢；③可調節(jié)控制通氣與血流比例。小氣管平滑肌細胞主要功能：①保持氣道張力維持小氣道形態(tài)；②肺小氣道進行氣體交換，病變可引起換氣功能障礙；③炎癥、痰液阻塞或當氣道外壓大于氣道內壓時容易造成小氣道閉合、萎陷。小氣管平滑肌細胞與主要病生理變化：①支氣管炎；②肺氣腫；③慢性阻塞性肺疾病。

5.方法簡介：

()實驗室分離的人小氣道平滑肌細胞采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的人小氣道平滑肌細胞經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-H013

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài)成纖維細胞樣

傳代特性可傳5代左右；3代以內狀態(tài)最佳

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

人 KNG1 / Kininogen 1 ELISA配對抗體

甲型流感 H4N6 (A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配對抗體

人 NBL1 / DAND1 / DAN ELISA配對抗體

人 CHL-1 ELISA配對抗體

人 CD83 ELISA配對抗體

小鼠 PIGR ELISA配對抗體

人 DLL4 ELISA配對抗體

人 CD147 / EMMPRIN ELISA配對抗體

人 Urokinase / PLAU / UPA

小氣道平滑肌細胞ZNF364/BCA2/RNF115  相關基因2抗體（鋅指蛋白364） 規(guī)格: 0.2mlp53 DINP1  p53誘導核蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

50 T GSH—PX測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

2 ug pSUMO pSUMO 低溫運輸，-20℃保存

堿性膽鹽瓊脂  250g

1g D- 半乳糖醛酸 D-(+)-Galacturonic Acid Monohydrate     室溫干燥保存

20次 天凈沙通用型MLPA試劑盒 Single Cell RNA Amplification Kit -20℃保存

Maltose Binding Protein/MBP  麥芽糖結合蛋白抗體 0.2mlKLK5  激肽釋放5抗體 規(guī)格: 0.1ml

HRAS/Ras/Ras p21  原基因H-ras抗體 規(guī)格: 0.1ml

ALOXE3  表皮型脂氧合3抗體（魚鱗相關蛋白） 規(guī)格: 0.2ml

IQGAP1  支架蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

NUAK2  SNF1/AMP激相關激2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG/Cy7  Cy7標記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlGNMT  -N-甲基轉移 規(guī)格: 0.2ml