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上海撫生實業有限公司
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Equi-phi29 DNA Polymerase

參  考  價:1170 - 6240
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    經銷商

  • 所在地

    上海市

規格

1000U 1170元 15盒可售

10KU 6240元 15盒可售

更新時間:2023-11-06 14:23:57瀏覽次數:354次

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貨號 A-PJ1053 分類 其他DNA/RNA聚合酶
規格 1000U、10KU 品牌 撫生
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公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

產品介紹:

Equi-phi29 DNA Polymerase

是 phi29 的改造體,并經多次純化分離而得。在保留了 phi29 DNA 聚合酶的鏈置換、連續合成特性(>70kb)的基礎上,提高了滾環擴增的反應溫度,該酶酶可以在 42 度條件下持續的進行 DNA 合成(而 phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應活性很低)。

這種高溫的反應特性,在以下幾個方面對實驗有明顯的提升:

(1)在 NGS 測序中,其提升了高 GC 含量、回文結構等復雜模板的延伸能力,使得 NGS 的覆蓋度更均一,降低測序所需深度;

(2)高溫的反應條件,提升了基因組 DNA的 WGA 產物的合成量,并可以進行變溫擴增;

(3)降低測序中 Gap 區域,提升單細胞測序的數據質量和完整度;

(4)降低非特異性擴增產物;

(5)提升 MDA/RCA 等實驗的擴增性能和特異性。
除此外,該酶仍然具有很強的 3’→5’外切酶校讀功能,合成的 DNA 片段保真性高。該酶的外切酶活性較強,因此合成過程中引物需要 3’端硫代修飾,以降低外切活性對引物的切割效應。
image.png

儲存:-20℃可保存 3 年。
image.png注意:在不同的實驗類型中,Oligo根據實驗需要自行選擇。
2. 引物和模板退火:體系配制完畢后,放置到 PCR 儀中,95℃ 3min,25℃ 3min。3. 退火完畢后,向退火產物中加入 1μl Equi-phi29 DNAPolymerase,混合均勻。
4. 擴增反應
4.1 恒溫擴增
對于環狀DNA模板采用恒溫反應作為推薦使用30℃恒溫擴增,30℃孵育 6~16h.該酶在 30-42℃條件下均可工作,
必要時根據實驗類型進行調整。
4.2 變溫擴增
對于基因組 DNA 或 cDNA 模板,推薦使用變溫擴增反應,以在短時間內獲得更高產量,并提高了低濃度模板的擴增產量。在 PCR 儀上做如下設置:
【30℃ 5min;42℃ 15s】循環 72 次(約 6h)或 120次(約 10h).必要時,反應結束后,可于 65°C 10min 進行失活反應。
使用注意事項
(1)必要時可單獨額外添加終濃度 1 mM DTT 和 0.2mg/ml BSA,可提高反應效率。
(2)該酶的最佳反應溫度為 42 ℃ (在 30~42℃之間均有活性)。
(3)65℃ 10min 即可使該酶失活。
(4)根據實驗類型需要,調整dNTP的濃度100~500 μM。
(5)添加 Yeast Pyrophosphatase可提高 DNA 產量。
(6)反應引物 3’端的硫代修飾可避免引物降解。



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