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貨號(hào)	A01X934	規(guī)格	1×106
英文名稱	RKO細(xì)胞	產(chǎn)品分類	人細(xì)胞系
實(shí)驗(yàn)類型	MEM+10%FBS+1%F/S	報(bào)告	提供STR鑒定報(bào)告

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

名稱	RKO (人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)
種屬	人類
年齡（性別）	不詳
組織來源	結(jié)腸癌
生長特性	貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
背景描述	RKO細(xì)胞是一個(gè)低分化的結(jié)腸癌細(xì)胞系。RKO細(xì)胞含有野生型p53，但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRβ1)。RKO細(xì)胞的p53蛋白的水平高于RKO-E6細(xì)胞，RKO細(xì)胞是RKO-E6細(xì)胞和RKO-AS45-1細(xì)胞的親本細(xì)胞系。RKO細(xì)胞在裸鼠中成瘤，且在軟瓊脂中形成集落。
生物安全等級(jí)	1
生長培養(yǎng)基	MEM＋10% FBS＋1% P/S
推薦傳代比例	1:3-1:4
推薦換液頻率	2~3次/周
倍增時(shí)間	~21小時(shí)
凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
致瘤性	Yes, in nude mice.Yes, in soft agar.
受體表達(dá)情況	urokinase receptor (u-PAR)
保藏機(jī)構(gòu)	ATCC; CRL-2577

細(xì)胞傳代：

1. RKO人結(jié)腸腺癌細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。

2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。

6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。

8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

IV型膠原蛋白/4型膠原蛋白/膠原蛋白4封閉多肽	腸賈第蟲PCR檢測試劑盒
狂犬病病毒固定毒株RT-PCR試劑盒	非紅細(xì)胞血影蛋白β4ELISA試劑盒
人吡哆醛/吡哆醇B6磷suanmei(PDXP)ELISA Kit	泛醌蛋白4ELISA試劑盒
人P53抗體試劑盒ELISA	二肽基肽mei6ELISA試劑盒
人補(bǔ)體片斷5b(C5b)ELISA檢測試劑盒	二肽mei3ELISA試劑盒
人γ-谷氨酰環(huán)化轉(zhuǎn)移mei(GGCT)ELISA試劑盒	c-myc癌基因產(chǎn)物ELISA試劑盒
磷suan化微管結(jié)合蛋白CYLD封閉多肽	病毒PCR試劑盒
MSL3L2蛋白封閉多肽	鳥分枝桿菌PCR試劑盒
DjC8蛋白封閉多肽	鳥類多瘤病毒PCR試劑盒
脂蛋白受體相關(guān)蛋白/低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1封閉多肽	嗜肺軍團(tuán)菌16S rRNA基因(160bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒
DNAJC25蛋白封閉多肽	捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR試劑盒
IOC4	RKO人結(jié)腸腺癌細(xì)胞牛BGH基因核suan檢測試劑盒
電壓門控鉀通道亞基Kv7.3封閉多肽	鳥分枝桿菌類結(jié)核亞型PCR試劑盒
驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員26A封閉多肽	捻轉(zhuǎn)血矛線蟲PCR試劑盒
鈣調(diào)蛋白OCM2封閉多肽	鳥類多瘤病毒PCR試劑盒

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。