使用方法：

1、將ELISA試劑盒各組分恢復室溫（大約30分），同時用純水將20×洗滌液配成工作液（每份濃縮洗滌液加19份純水）。

2、取出酶標板；扣取適量酶標板條，每個標本需要8孔，陽性對照8孔，陰性對照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

3、將標本檢測孔每孔先加入標本稀釋液各50μl。然后將50μl細胞培養上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標微孔板，每個標本加8孔；陽性對照和陰性對照孔不加標本稀釋液，各加8孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

4、反應完畢后棄去板內液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的8孔中分別加入8種酶標二抗各100μl，通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

5、吸棄板內液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入單組份TMB底物液100μl，封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

6、本試劑盒特異性好，可肉眼觀察顯色結果，確定顯色孔所對應的酶標二抗判斷此標本的Ig類或亞類。也可將反應終止液（每孔50μl）終止反應后用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結果，參看高值孔所對應的酶標二抗判定此標本的Ig類或亞類(陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.15，陽性判定標準：樣品OD大于陰性OD+0.15，陰性OD低于0.05按0.05算)。

注：單抗屬于雜交瘤融合得來，存在一定比例的變異，另外，如果待檢樣品濃度太高也容易造成背景偏高，原則上以高值孔對應的亞類為準！

注意事項：

1.  本試劑盒實際壽命遠比標示的有效期更長，超過有效期后可能仍可使用，但是不建議您使用，請您在有效期內使用；超過有效期使用產品產生的問題不在售后范疇。

2.  由于腹水成分十分復雜，本試劑盒不建議用于腹水檢測，如果需要檢測腹水，請購買本公司其他試劑盒；如果確實需要用本試劑盒檢測腹水亞型，建議將腹水稀釋1-5萬倍，同時使用自包被的抗原板子替代本試劑盒中的酶標板，此種情況下本試劑盒中的陽性對照可能不能正常工作。

3.  手工洗板時，洗液要加滿板孔，浸泡10秒然后棄盡，最后要拍干凈。加入的酶標二抗溫育后，要把酶標液吸凈，不要直接甩出，這個在手工洗板時對結果很重要。

4.  一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

5.  拿放加樣后的板子不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現錯誤結果。

6.  本試劑一般不會出現兩個陽性，但出現兩個陽性的現象現實中是真實存在的，一般會取高OD值判為陽性，出現這種情況有多重原因：

1）培養的細胞中有“飼養細胞"殘留；

2）由于單抗研制存在人工干預步驟因此抗體本身有可能會存在亞類結構上的輕微變異； 

3）樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，

4）上清出現少量污染；

5）實驗操作粗放；

6）加錯試劑；

7）樣品中抗體濃度太高。