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細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)必須 的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。接下來來了解在培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中有有幾種試劑:
(1)高糖DMEM溶液: 用新配制的三蒸水配制,高糖DMEM干粉(規(guī)格10×1L),溶入約總量的1/3的三蒸水,并用水洗凈包裝袋,在磁力攪拌器上攪拌30分鐘,加入NaHCO2 3.75克,補(bǔ)加水至最終量。用1N HCL調(diào)整PH為7.2,0.22μm濾膜抽濾除菌,分裝-20℃保存,使用時(shí)加10%的胎牛血清及雙抗溶液(最終濃度:青霉素100U/ml,鏈霉素 100μg/ml)
(2) 胎牛血清: 使用前56℃水浴30分鐘滅活,無菌條件下分裝成10ml包裝,-20℃保存。用時(shí)以10%濃度注入培養(yǎng)液中。
(3) 青霉素、鏈霉素雙抗溶液 青霉素100萬單位及硫酸鏈霉素1g無菌條件下溶于消毒三蒸水10ml,分裝,-20℃保存。使用時(shí)每1000ml培養(yǎng)液加入青、鏈霉素混合液1ml,最終濃度為青霉素100單位/ml,鏈霉素100μg/ml。
(4)磷酸鹽溶液(PBS): NaCl 8g, KCl 0.4g, NaHPO4.H2O 1.15g KH2PO4 0.2g 分別溶于1000ml三蒸水中,調(diào)節(jié)PH值至7.4高壓蒸氣滅菌,分裝后4℃保存。
(5)胰蛋白酶溶液: 用三蒸水制備成0.25%濃度,0.22μm濾膜抽濾除菌,4℃保存。
(6)0.1%明膠溶液: 稱取明膠粉劑0.1g于燒杯中,加入三蒸水100mL于50℃充分?jǐn)嚢柚疗?溶解,0.22μm濾膜抽濾除菌,4℃保存。
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