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如何配胰蛋白酶溶液

時間:2020/1/7閱讀:1342
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    在細胞培養中我們會經常用到胰蛋白酶溶液。在試驗中胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。古朵生物技術支持部分特別整理這篇文章,告訴你如何配胰蛋白酶溶液。

    胰蛋白酶溶液的配制:

    (1)稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(pH7.2左右)調成糊狀,然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時或冰箱過夜,并不斷攪拌振蕩;

    (2)次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾除菌,分裝入瓶中,低溫冰箱保存備用,常用濃度為0.25%或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH至7.2左右。

    保存條件:配制好的胰蛋白酶溶液必須保存在-20℃冰箱中,以免分解失效。

    EDTA?4Na溶液

    EDTA是一種化學螯合劑,對細胞有一定的離觧作用,而且毒性小,價格低廉,使用方便。常用工作液濃度為0.02%。通常與0.25%的胰蛋白酶溶液按1:1混合使用(混合液)。注意:使用EDTA處理細胞后,一定要用Hanks液沖洗干凈,因殘留的EDTA會影響細胞生長。

    EDTA溶液配制:用無鈣、鎂的D-HBSS平衡鹽溶液溶解后,高壓蒸汽滅菌,分裝成小瓶,室溫或4℃冰箱保存。

    胰蛋白酶–EDTA?4Na溶液(0.05%胰蛋白酶,0.53mMEDTA?4Na)

    0.5g胰蛋白酶+0.2gEDTA?4Na+1LD-HBSS。-20℃冰箱中保存。

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