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一些特殊組織的RNA提取

時(shí)間:2019/12/16閱讀:919
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    1、纖維組織

    心臟/骨骼肌等纖維組織提取RNA的關(guān)鍵在于*破碎組織。這些組織細(xì)胞密度低,單位重量的組織RNA的含量就少,建議用盡可能多的起始量。使用TRNzol法可以提取纖維組織終RNA,由于纖維組織終RNA含量較少,可按照增加的起始量成比例增加TRNzol的用量,并在液氮中將組織*磨碎,同時(shí)適當(dāng)減少溶解RNA的溶液體積。

    2、核酸/RNase含量高的組織

    脾、胸腺、胰臟等組織的核酸和核酸酶含量很高,可以在液氮中碾磨組織,再快速勻漿。如果裂解液太粘稠(因?yàn)楹怂岷扛叩木壒剩?lv仿抽提不能有效分層,可以加入更多裂解液以解決此類問題。如果加入乙醇后馬上有白色沉淀形成則表明有DNA污染,可以在核酸溶解后用酸性酚/lv仿再次抽提,去除DNA污染。

    3、蛋白/脂肪含量高的組織

    動(dòng)物的腦和某些特殊的植物組織中,脂肪或者蛋白的含量很高,可以采用TRNzol來提取此類樣品中的RNA。在該提取過程中,用lv仿抽提后,如上清仍含白色絮狀物,必須用lv仿再次對(duì)上清進(jìn)行抽提。使用TRNzol提取脂肪含量高的組織中RNA時(shí),使用lv仿抽提后會(huì)分成油滴、水相(含RNA)、DNA中間層、有機(jī)相四層,應(yīng)用移液管小心吸取水相液體,避免吸到油滴層和DNA層。

    4、植物組織和真菌組織

    植物組織和真菌組織比動(dòng)物組織更為復(fù)雜,因此為了避免出現(xiàn)內(nèi)源酶作用使 RNA降解的現(xiàn)象,一般選擇在液氮條件下對(duì)植物或者真菌材料進(jìn)行碾磨。如果降解問題不能解決,基本上是由于樣品中的內(nèi)含雜質(zhì)導(dǎo)致。許多植物和真菌中的內(nèi)含雜質(zhì)如多糖、多酚等都會(huì)殘留,因?yàn)檫@些雜質(zhì)分子與RNA有一些相似性,可以與RNA同時(shí)沉淀或者吸附,因此在植物和真菌組織的RNA提取過程中,需要用一些特別的步驟或者特別的試劑(RNAplant)來去除多糖多酚等雜質(zhì)的干擾和污染。

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