ELISA試劑盒實驗中的封閉液小知識

    ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點，蔗糖封閉的原理：

    1.ELISA實驗中，蔗糖本身沒有封閉作用;

    2.封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

    3.加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護劑”的作用。

    4.蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。

    封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實驗表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。

    封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實驗的準確度。

    ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

    ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/p>

    1.ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
      NaHCO3 1.59克
      NaHCO3 2.93克
      加蒸餾水至1000ml

    2.ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M
      KH2PO4 0.2克
      Na2HPO4·12H2O 2.9克
      NaCl 8.0克
      KCl 0.2克
      Tween-20 0.05% 0.5ml
      加蒸餾水至1000ml

    3.ELISA實驗稀釋液：
      牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
      加洗滌緩沖液至100ml
      或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

    4.ELISA實驗終止液(2M H2SO4)：
       蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

    5. ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
       0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml
       0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
       加蒸餾水50ml。

    6.ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
      TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml
      底物緩沖液(PH5.5) 10ml
      0.75%H2O2 32μl

    7.ELISA實驗ABTS使用液:
      ABTS 0.5mg
      底物緩沖液(PH5.5) 1ml
      3%H2O2 2μl

    8.ELISA實驗封閉液：
      牛血清白蛋白(BSA) 5克
      加洗滌緩沖液至100ml。
      值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

    為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。