酶聯免疫吸附試驗
酶聯免疫吸附試驗(又稱酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunoassay,簡稱ELISA)利用抗原抗體之間專一性鍵結之特性,對檢體進行檢測;由于結合于固體承載物(一般為塑膠孔盤)上之抗原或抗體仍可具有免疫活性,因此設計其鍵結機制后,配合酵素呈色反應,即可顯示特定抗原或抗體是否存在,并可利用呈色之深淺進行定量分析。根據待測樣品與鍵結機制的不同,ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式,主要以三明治法(sandwich)、間接法(indirect)、以及競爭法(Competitive)三種為主。
Western blot
是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法,也是HIV檢測的方法之一。
利用特定抗體能夠專一結合其抗原蛋白質的原理來對樣品進行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息,來分析檢測特定蛋白質的生物學檢測技術。
一般認為是美國斯坦福大學的喬治·斯塔克(George Stark)。在尼爾·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化學》(Analytical Biochemistry)中被稱為Western Blot。
Western Blot與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。
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