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ELISA技術(shù)和WESTERN的不同是什么?

時(shí)間:2019/8/21閱讀:936
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    酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
    酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(又稱酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunoassay,簡(jiǎn)稱ELISA)利用抗原抗體之間專一性鍵結(jié)之特性,對(duì)檢體進(jìn)行檢測(cè);由于結(jié)合于固體承載物(一般為塑膠孔盤(pán))上之抗原或抗體仍可具有免疫活性,因此設(shè)計(jì)其鍵結(jié)機(jī)制后,配合酵素呈色反應(yīng),即可顯示特定抗原或抗體是否存在,并可利用呈色之深淺進(jìn)行定量分析。根據(jù)待測(cè)樣品與鍵結(jié)機(jī)制的不同,ELISA可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方式,主要以三明治法(sandwich)、間接法(indirect)、以及競(jìng)爭(zhēng)法(Competitive)三種為主。


    Western blot
    是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法,也是HIV檢測(cè)的方法之一。

 

    利用特定抗體能夠?qū)R唤Y(jié)合其抗原蛋白質(zhì)的原理來(lái)對(duì)樣品進(jìn)行著色,通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中的表達(dá)情況的信息,來(lái)分析檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。

 

    一般認(rèn)為是美國(guó)斯坦福大學(xué)的喬治·斯塔克(George Stark)。在尼爾·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化學(xué)》(Analytical Biochemistry)中被稱為Western Blot。

 

    Western Blot與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測(cè)物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

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