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過氧化氫檢測試劑盒使用說明:
1. 樣品測定的準備:
(1)細胞或組織樣品的制備
對于培養的細胞,先收集細胞到離心管內,棄上清,按照每100萬細胞加入100-200微升過氧化氫檢測
裂解液的比例加入裂解液,隨后充分勻漿以破碎并裂解細胞。4℃約12000g離心3-5分鐘,取上清,用
于后續測定。組織樣品按照每5-10mg組織加入100-200微升裂解液的比例進行勻漿。4℃約12000g離
心3-5分鐘,取上清用于后續測定。以上所有操作均需在4℃或冰上操作。制備好的細胞或組織樣品如
果不立即測定,可以-20℃凍存。
(2)培養細胞上清液樣品的制備
培養細胞的上清液可以直接用于后續的測定。
(3)血清、血漿或尿液樣品的準備:
配制50mM磷酸緩沖液,pH為6.0。用pH為6.0的50mM磷酸緩沖液把樣品稀釋50倍。例如4微升樣品稀釋
到196微升pH為6.0的50mM磷酸緩沖液中。稀釋后即可用于后續的測定。
2. 標準曲線測定的準備:
樣品在什么溶液中標準品也需用什么溶液稀釋,這樣可以減小誤差。例如對于細胞樣品,標準品宜用
過氧化氫檢測裂解液稀釋,對于培養細胞的上清液樣品,標準品宜用相應的細胞培養液稀釋。標準溶
液可以稀釋成1、3、10、30、100微摩爾/升,或1、2、5、10、20、50、100微摩爾/升,初次測定后
知道樣品的濃度范圍后可以對標準品在樣品濃度范圍附近密集測定。
3. 過氧化氫濃度的測定:
(1)把過氧化氫檢測試劑在冰上或冰水浴上融解。
(2)在檢測孔或檢測管內加入50微升樣品或標準品。
(3)在每個孔內加入100微升過氧化氫檢測試劑。
(4)輕輕振蕩或敲打混勻,室溫(15-30℃)放置30分鐘。然后立即測定A560。如測A560有困難,波長
可以選擇540-570nm。
(5)根據標準曲線計算出樣品中過氧化氫的濃度。
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