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測(cè)定方法是以抗原和抗體分子為測(cè)定靶標(biāo)的方法，亦是目前zui為常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法之一。
從理論上說(shuō)，一種生物或生理活性物質(zhì)，只要有辦法得到其特異的抗體，就可以建立這種物質(zhì)的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法。在以前看來(lái)一些難以進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定的微量生物活性物質(zhì)，如受體、細(xì)胞因子以及酶等均可使用酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)來(lái)測(cè)定。酶聯(lián)免疫測(cè)定方法是以抗原抗體間的特異反應(yīng)為基礎(chǔ)的，其與生化的化學(xué)反應(yīng)有著本質(zhì)的區(qū)別，并且由于標(biāo)記物如同位素、酶、熒光素、微量元素、發(fā)光物質(zhì)等的摻人，酶聯(lián)免疫測(cè)定技術(shù)從低靈敏的免疫沉淀和免疫凝集反應(yīng)進(jìn)入到了高靈敏的放射免疫、酶免疫、熒光免疫和發(fā)光免疫測(cè)定時(shí)代，可見(jiàn)酶聯(lián)免疫測(cè)定更多的是用于生物活性物質(zhì)的微量測(cè)定。
目前在上，很多重要的疾病診斷標(biāo)志物均使用酶聯(lián)免疫測(cè)定方法來(lái)檢測(cè)，如抗HAV IgM，乙肝“兩對(duì)半”、抗HCV，抗HIV，梅毒抗體、優(yōu)生優(yōu)育TORCH系列、性病病原體的抗原或抗體等傳染性病原體血清標(biāo)志物、激素、腫瘤標(biāo)志物、自身抗體、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物以及HBVDNA，HCV-RNA，遺傳病基因、腫瘤基因、基因突變等，這些標(biāo)志物的檢測(cè)質(zhì)量直接關(guān)系到患者的診斷和治療。
而在血站，HBsAg，抗HCV，抗HIV和梅毒抗體等標(biāo)志物的檢測(cè)，哪怕是1％的錯(cuò)誤，對(duì)將要接受輸血的特定患者來(lái)說(shuō)，就是100％的災(zāi)難。近期，在電視、報(bào)紙等新聞媒體中，常可見(jiàn)到一些有關(guān)醫(yī)患糾紛的報(bào)道，其中一些就與酶聯(lián)免疫測(cè)定有關(guān)，如輸血后丙肝病毒、艾滋病毒感染的發(fā)生，性病檢測(cè)的假陽(yáng)性等。可見(jiàn)，酶聯(lián)免疫測(cè)定的質(zhì)量控制有多么重要。
ELISA試劑盒檢測(cè)中樣品的處理
1．細(xì)胞培養(yǎng)物上清：
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．血清：
標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4．尿液：
無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測(cè)，要*保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱*保存。
5．組織勻漿：
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)夜，再經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。
注：取樣和樣品處理過(guò)程中，防止有毒物質(zhì)對(duì)操作人員的危害，要采取相應(yīng)的保護(hù)措施。
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