99爱免费_精品一区二区无码AV_欧美屁股xxxxx_日批视频国产_AV天堂亚洲区无码先锋影音_特黄A又粗又大又黄又爽A片

上海金穗生物科技有限公司
免費會員

選擇和篩選親和力更高的抗體

時間:2013-1-10閱讀:466
分享:

        選擇方法必須精心設計以便能選擇到親合力更高的抗體.而非那些在隙菌體中展示較佳、對大腸桿菌毒性較低、較為穩定或者多聚化形成而改變親和性(avidity)使得功能性親和力提高的克隆。有兩種方法可用于從低親和力或非結合性scFv本底下選擇到稀有的高親和力scFv:一種是根據結合動力學方法;另一種是根據平衡常數(Kd)的方法。無論哪種方法,很重要的是,要采用液相標記抗原而不是吸附于固相基質的抗原。使用可溶性抗原將偏向于根據結合親和力或結合動力學的選擇.而不是依據親和性(avidity)的選擇。當對scFv文庫進行選擇時.這尤為重要。因為已知有些scFv能按照一種序列依賴方式自發形成二聚體。不采用可溶性抗原可能導致選擇到二聚化scFv,而其單價結合常數并不高于野生型。甚至對于Fab模式也要采用可溶性抗原,從而避免選擇到展示了多拷貝Fab的噬菌體,后者僅有更高的功能性親和力(avidity)而已。

在基于結合動力學,也被稱為解離速率(κoff)]的選擇中,在將遠遠過量的非標記抗原加入到混合液中并維持一段特定時間之前,將首先選用飽和量的標記抗原使其與噬菌體群結果。通過確定與末標記抗原競爭的持續的時間,將允許大多數結合的野生型抗體解離,而優化的突變體卻仍然結合著,這個方法對于具有較慢解離速率的突變體的選擇是很有效的。因為V基因無論在體內或體外發生突變時,κoff下降都是一個產生高親和力的主要動力學機制。一般而言,此法可以選擇到(Kd)更佳的scFv。

我們通常傾向于平衡選擇法。在這個方法中,噬菌體與濃度低于平衡結合常數的抗原一同被孵育。它可以有效地選擇到改善平衡常數的抗體。抗原濃度下降也有助于確保選擇到高親和力scFv,而不是那些在噬菌體中表達較佳或對大腸桿菌毒性較低的抗體。使用可溶性抗原就能設置超過平衡選擇方法所需抗原濃度的對照。噬菌體可以先結合*化抗原,而后用鏈霉親和素化磁珠進行回收。可以預先估計選擇所用的適宜抗原濃度,但我們傾向于在*輪中采用幾個不同的抗原濃度。后續幾輪選擇的抗原濃度可以根據測定結合性噬菌體在產出的多克隆噬菌體中結合性噬菌體的比例來決定。用Biacore進行表面等離子共振技術(SPR)測定是為準確的。結合濃度測定是在物質運輸受限條件下進行的。另外.也可用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定結合性克隆的比例。分析這些數據就可以在下一輪選擇前確定出佳抗原濃度。我們在每一輪選擇后,一般會把抗原濃度降低10~100倍。在3~5輪選擇后,就可以篩選親和力得到優化的克隆了。

 
    選擇方法必須精心設計以便能選擇到親合力更高的抗體.而非那些在隙菌體中展示較佳、對大腸桿菌毒性較低、較為穩定或者多聚化形成而改變親和性(avidity)使得功能性親和力提高的克隆。有兩種方法可用于從低親和力或非結合性scFv本底下選擇到稀有的高親和力scFv:一種是根據結合動力學方法;另一種是根據平衡常數(Kd)的方法。無論哪種方法,很重要的是,要采用液相標記抗原而不是吸附于固相基質的抗原。使用可溶性抗原將偏向于根據結合親和力或結合動力學的選擇.而不是依據親和性(avidity)的選擇。當對scFv文庫進行選擇時.這尤為重要。因為已知有些scFv能按照一種序列依賴方式自發形成二聚體。不采用可溶性抗原可能導致選擇到二聚化scFv,而其單價結合常數并不高于野生型。甚至對于Fab模式也要采用可溶性抗原,從而避免選擇到展示了多拷貝Fab的噬菌體,后者僅有更高的功能性親和力(avidity)而已。
 
    在基于結合動力學,也被稱為解離速率(κoff)]的選擇中,在將遠遠過量的非標記抗原加入到混合液中并維持一段特定時間之前,將首先選用飽和量的標記抗原使其與噬菌體群結果。通過確定與末標記抗原競爭的持續的時間,將允許大多數結合的野生型抗體解離,而優化的突變體卻仍然結合著,這個方法對于具有較慢解離速率的突變體的選擇是很有效的。因為V基因無論在體內或體外發生突變時,κoff下降都是一個產生高親和力的主要動力學機制。一般而言,此法可以選擇到(Kd)更佳的scFv。
 
    我們通常傾向于平衡選擇法。在這個方法中,噬菌體與濃度低于平衡結合常數的抗原一同被孵育。它可以有效地選擇到改善平衡常數的抗體。抗原濃度下降也有助于確保選擇到高親和力scFv,而不是那些在噬菌體中表達較佳或對大腸桿菌毒性較低的抗體。使用可溶性抗原就能設置超過平衡選擇方法所需抗原濃度的對照。噬菌體可以先結合*化抗原,而后用鏈霉親和素化磁珠進行回收。可以預先估計選擇所用的適宜抗原濃度,但我們傾向于在*輪中采用幾個不同的抗原濃度。后續幾輪選擇的抗原濃度可以根據測定結合性噬菌體在產出的多克隆噬菌體中結合性噬菌體的比例來決定。用Biacore進行表面等離子共振技術(SPR)測定是為準確的。結合濃度測定是在物質運輸受限條件下進行的。另外.也可用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定結合性克隆的比例。分析這些數據就可以在下一輪選擇前確定出佳抗原濃度。我們在每一輪選擇后,一般會把抗原濃度降低10~100倍。在3~5輪選擇后,就可以篩選親和力得到優化的克隆了。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 日本久久99成人网站|99视频在线免费看|亚洲一区成人在线观看|青草福利在线|中文字幕无线码中文字幕免费|亚洲视频h | 好男人日本社区www|国产精品乱码一区二三区小蝌蚪|欧亚精品一区|国产欧美在线免费观看|我爱草逼网|乱码专区一卡二卡国色天香 | 国产精品视频最多的网站|韓國三級大全久久網站|日韩推理片免费观看|60岁老女人高潮表现|日本免费专区|亚洲第一成人在线观看 | 在线看免费观看=av|十九岁大学生日本在线播放|91在线看视频|欧美日韩国产综合新一区|韩日黄色毛片|刘亦菲精品国产亚洲人成 | 精品国产免费久久久久久桃子图片|六月婷婷久久|黄色在线观看免费视频|丰满熟妇XXXX性PPX人交|国内自拍网址|97色干 | 6996网站免费观看|麻豆传媒免费在线观看|欧美多p视频|老司机午夜在线|亚洲国产高清理论片|国产在线高清观看 | 狠狠噜天天噜日日噜无码|欧美=a=av|日批视频在线看|少妇videos|免费ā片在线观看|国产成人美女=aV | 九九爱精品|无码精品=a∨在线观看|岛国视频在线|3D动漫精品啪啪一区二区免费|妺妺窝人体色WWW聚色窝|99色视频在线 | 国产黄=a一级|亚洲人成网站18禁止人|#NAME?|视频一区二区高清在线播放|在线看一区|伊人久久大香线蕉=aV一区 | 国产精彩免费视频|国产91亚洲精品一区二区三区|特黄男女交性=a片激情视频|日韩精品一二三四|www毛片|wwwxxxxx国产 | 国产一区二区女内射|热久久视久久精品2020|91精品国产入口|久久综合精品视频|亚洲=aV超清无码不卡在线观看|在线观看国产精品日韩=av | 三级日韩|亚洲=aⅴ在线|成人精品玖玖资源在线播放|黄网在线免费观看|免费观看又色又爽又湿的软件|奇米四色888 | 久久精品国产清高在天天线|天堂在线观看www|毛片=av在线免费观看|精品国产欧美一区二区五十路|老熟女草BX×|人妻慢慢放弃抵抗开始迎合 | 国产亚洲精品一区二区三区|狠狠插综合网|把女人弄爽特黄=a大片3人|国产精品99久久久久久人免费|永夜星河免费在线观看|日日做=a爰片久久毛片=a片英语 | 午夜国产在线|国产人妻无码一区二区三区婷婷|中文字幕免费在线看|2021国产麻豆剧传媒精品入口|日日射夜夜|免费久久99精品国产 | 国产精品婷婷色综合www在线|丰满风流护士长BD=a片|国产精品福利片|农村人伦偷精品视频=a人人澡|久热免费在线视频|18禁美女黄网站色大片免费网站 | 中文字幕人妻高清乱码|久久久无码人妻精品一区|国产精品第八页|国产美女被遭强高潮网站不再|石原莉奈无删减在线观看|欧美成年网站 | 精品国产91一区二区三区|55夜色66夜色国产精品|日韩久久久久久|一=a一片一级一片按摩师|91麻豆一区二区|成=av人片在线观看www | 午夜福利免费院|久草成色在线|一区二区国产高清视频在线|哪里有免费的黄色网址|亚洲久久在线观看|人妻中文无码就熟专区 | 亚洲免费看片网站|欧美香蕉|久久免费视老师机影片|国产精品成人久久小草|日本熟妇大屁股人妻|性色=a∨人人爽网站HDkp885 | 在线视频爽爽|最新中文字幕=aV无码不卡|精品无码国产自产拍在线观看蜜|h333.tv免费看片|色哟哟软件|国产乱子伦一区二区三区= | 日韩亚洲欧美中文字幕|国产精品久久久久久亚洲调教|5060网永久免费=a级毛片|人妻少妇久久久久久97人妻|国产成人无码=a区视频在线观看|欧美理论视频 | 亚洲=av无码=av另类专区|久久日韩精品无码一区|日韩精品中文在线|久久精品国产综合|c=aoporm超碰国产牛牛|九色国产蝌蚪视频 | 男女日批免费视频|九九免费观看全部免费视频|日韩精品免费一区二区夜夜嗨|中文字幕在线播放第一页|中国少妇xxxx|欧洲人体超大胆露私视频 | 亚洲精品夜夜夜|99国产精品久久久久久|国产精品网页|色综合1|91玖玖|久久这里只有 | 麻豆=aV一区二区三区|成人午夜看片|夜夜爽日日澡人人添蜜臀|性做久久久久久久久久|无遮挡又黄又刺激的视频|九一免费观看网站 | 干亚洲美女|亚洲视频精选|91国自视频|亚洲一级影片|韩国三级在线中文字幕无码|xxx黄色片 | 视频二区在线|www激情|色在线视频播放|老师你兔子好软水好多视频|满嘴射影院|国产亚洲区 | 在线观看免费黄网|久久久久久久久久久鸭|91社影院|日本一区免费网站|尹人香蕉久久99天天拍|任我爽橹在线精品视频 | 国产=a级一区二区|免费观看=av福利片|欧美一二三区精品|一本到无码=aV专区无码|好爽...又高潮了毛片|精品人人搡人妻人人玩=a片 | 成人国产精品免费视频|免费视频97|成年人深夜福利|国产精品亚洲一区二区三区在线观看|亚洲性久久9久久爽|超碰超碰97 | 99免费在线播放99久久免费|伊人久久在|在线观看91精品视频|国产精品国产三级国产=a|毛片视频大全|亚洲黄色片免费看 激情综合欧美|日本一区欧美|97色伦欧美一区二区日韩|国产东北女人做受=av|又色又爽又黄又粗暴的小说|中文字幕无码日韩欧毛 | 欧美日本国产在线观看|日本一区二区三区国色天香|校园春色~综合网|欧美一级色|91精品在线观|日韩欧美高清一区二区 | 91=av免费看|久久久夜色|免费在线观看日韩|2020亚洲天堂|中国毛茸茸性XXXX|国产精品女人久久久久久 | 亚洲综合自拍|国产一区二区三区久久|亚洲男人第一=aV网站|精品黄网|成年免费视频|欧美三个奶波霸 | 亚洲精品.www|亚洲精品无码久久久影院相关影片|欧美日韩视频网站|在线观看潮喷失禁大喷水无码|免费看一区二区成人=a片|亚洲国产高清不卡视频 | 高清视频在线播放|天堂资源在线www中文|无码人妻=aⅤ一区二区三区|亚洲一区中文字幕永久在线|中文字幕第27页|免费69视频 | 国语精品对白露脸少妇网站|快好爽射给我视频|国产熟妇另类久久久久久|在线看免费视频|www久久九|亚洲综合欧美另类 | 无遮挡吃胸膜奶免费网站|操操日日|最近日本mv字幕免费观看视频|久久国产劲爆∧V内射-百度|午夜视频在线免费观看|无码=av中文一区二区三区 | 国产精品一区2区3区|91蝌蚪在线播放|一级国产20岁美女毛片|国产伦精品一区二区三区视频不卡|少妇内射兰兰久久|日本成人=a | 亚洲伦理一区二区三区|在线观看=aV网站永久免费观看|狠狠色婷婷丁香五月|色翁荡息又大又硬又粗又爽|中文色视频|成年人免费看的 |