孕馬血清腺激素的生物學測定

一.實驗特點
實驗類型：設計型實驗 實驗類別：專業基礎課
計劃學時：4學時 每組人數： 4～5人
二．實驗目的要求
生物學測定法是根據一些動物的靶器官和靶組織對激素反應程度來測定激素含量的方法，是zui早應用于激素測定的經典方法，能夠直接反應激素的生物活性，也稱作激素的生物學效價，其它的測定方法往往以此種方法加以驗證。要求學生通過孕馬血清*的活性測定，掌握激素的生物學測定方法。
三．實驗原理
PMSG的生物學測定法是以即將達到性成熟或摘除垂體的小鼠或大鼠，注射含有待測激素樣品后，觀察其子宮或卵巢增重及卵泡發育等變化。凡是引起確定的生理變化的zui低有效劑量，即相當于一個效價單位（如小鼠單位或大鼠單位）。
母馬在妊娠的40天，PMSG開始出現，增長至70天達到，持續到120天，每升血液中可達7萬單位以上，然后開始下降，大約在170天時降到幾乎測不出的程度。 PMSG 能促進動物卵巢機能，進而引起子宮增生和生長的變化。以性未成熟的小白鼠子宮增大程度為測定活性的根據，來測定該激素引起小白鼠子宮陽性反應的zui低濃度，來進行計算預測定的PMSG樣品的活性。即為能引起未成熟的小白鼠子宮增大一倍PMSG的量稱之一個小白鼠單位。
四．實驗動物和器材
1.同品系20～21日齡，體重10～12g性未成熟的雌性健康小白鼠25只（每一實驗教學組）。
2.含PMSG血清樣品或稀釋的PMSG和滅菌生理鹽水。
3.5ml注射器5只，5號小針頭5只，試管架1個，1ml、2ml、5ml、10ml吸量管各一支，吸耳球一個，10 ml試管5支，20ml試管二支，剪子，鑷子。
五．實驗內容步驟
1. 將25只小白鼠隨機分為5組，每組5只，其中4組為實驗組，另一組做為對照組。
2. 取滅菌后的試管4支，分別加人生理鹽水11、2、4、6ml，吸取1ml樣品血清或PMSG稀釋液加人到*支試管中，充分混勻。再取此試管的稀釋血清在其他三支試管中各加入2ml，混勻后其血清濃度分別為1/12，1/24，1/36 和1/48。
3. 用4種濃度的稀釋血清各注射小白鼠5只，每只小白鼠腹部皮下注射0.2ml。要求注射部位準確，不得外漏，各組小鼠不得混串。
4. 另外5只小白鼠按相同劑量注射生理鹽水，作為對照組。
5. 注射后按常規飼養，待72小時后剖檢，并與對照組相比較觀察子宮增大情況，每組若有3只或3只以上的小白鼠子宮呈陽性反應（增大一倍以上），則認為該組濃度為陽性組。
6. 將zui低的有效濃度血清分母乘5，所得的數值即為每ml血清樣品中含有*的小白鼠單位。
六．實驗結果
1．所有實驗組均為陰性
2．所有實驗組均為陽性
*種情況說明稀釋倍數低了，第二種情況稀釋倍數高了。