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上海撫生實業(yè)有限公司
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當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)

細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)

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更新時間:2022-05-09 09:15:02瀏覽次數(shù):4623次

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上市時間:
2018-12-11
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貨號 FS-X9523
細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)正在熱銷的產(chǎn)品:果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶測試盒 規(guī)格:100管/96樣 測試方法:微量法
半乳糖含量測試盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:高效液相色譜法
乳糖含量測試盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:高效液相色譜法
麥芽糖含量測試盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:高效液相色譜法
葡萄糖含量測試盒 規(guī)格:5

中文名稱:細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)

英文名稱:Hoechst Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格:100次

貨號:FS-X9523

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡便的細(xì)胞凋亡檢測方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時,染色質(zhì)會固縮。所以Hoechst 33258染色后,在熒光顯微鏡下觀察,正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色,而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染,顏色有些發(fā)白。

試劑盒特點:

1. 只需25分鐘即可完成細(xì)胞凋亡檢測的整個過程。

2. 本試劑盒提供了固定液,染色液,及抗熒光淬滅封片液。

3. 本試劑盒對貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞和組織切片均適用。

4. 足夠檢測100個樣品。

試劑盒組份:

固定液————————————50ml

Hoechst 33258染色液 —————50ml

抗熒光淬滅封片液 —————— 5ml

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

白介素12(IL-12/P40)elisa檢測試劑盒  英文名稱:IL-12/P40 ELISA Kit,IL-12/P40,

β羥丁酸(β-OHB)elisa檢測試劑盒  英文名稱:β-OHB ELISA Kit,β-OHB,

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環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa檢測試劑盒  英文名稱:cGMP ELISA Kit,cGMP,

patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)elisa檢測試劑盒  英文名稱:PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit,PNPLA3/ADPN/C22orf20,

骨鈣素(Osteocalcin)elisa檢測試劑盒  英文名稱:Osteocalcin ELISA Kit,Osteocalcin,

高密度脂蛋白(HDL)elisa檢測試劑盒  英文名稱:HDL ELISA Kit,HDL,

鈣轉(zhuǎn)運ATP酶2C型成員1(ATP2C1)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ATP2C1 ELISA Kit,ATP2C1,

生長激素釋放肽(Ghrelin)elisa檢測試劑盒  英文名稱:Ghrelin ELISA Kit,Ghrelin,
細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:20mg  英文名稱:

氟替卡松丙酸酯相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:25mg  英文名稱:

氟替卡松丙酸酯分離度用混合物標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:25mg  英文名稱:

醋酸戈雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:10mg  英文名稱:

重組蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:ea  英文名稱:

卡巴拉汀酒石酸鹽K-異構(gòu)體  規(guī)格:20mg  英文名稱:

群勃龍醋酸酯系統(tǒng)適用性混合物  規(guī)格:30mg  英文名稱:

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胺碘酮相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:25mg  英文名稱:Amiodarone Related Compound E

尼泊金甲酯標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:125mg  英文名稱:Methylparaben


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